小鼠主动脉平滑肌细胞

小鼠主动脉平滑肌细胞

基于酶消化-差速贴壁联合策略从C57BL/6小鼠主动脉平滑肌细胞组织获取平滑肌细胞，经 0.1% 胶原酶 IV 消化 2h 后通过 30% 胎牛血清梯度贴壁纯化，接种于纤连蛋白包被培养皿中，使用 DMEM 高糖培养基（含 15% FBS、10 ng/mL EGF 及 50 μg/mL 抗坏血酸）培养；通过免疫荧光双标检测 α-SMA/SM-MHC 共表达，RT-qPCR 分析平滑肌分化标志基因转录水平，并观察细胞在收缩刺激下的形态变化。

产品名称：小鼠主动脉平滑肌细胞

英文名称： Mouse Aortic Smooth Muscle Cells

组织来源： 主动脉组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠主动脉平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠主动脉平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  小鼠主动脉平滑肌细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3代左右

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠主动脉平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

复苏前期试剂耗材筹备：提前 37℃水浴复温平滑肌细胞完全培养基，准备无菌离心管、培养瓶、PBS 缓冲液、胰酶消化液，超净台紫外消毒，核对冻存细胞标签，检查试剂无沉淀浑浊，调试培养箱参数 37℃、5% CO₂。

冻存细胞水浴快速解冻：取出液氮冻存管，快速放入 37℃水浴，持续轻晃冻存管，1‑2min 融化冻存液，留有微量冰晶即可，取出冻存管，75% 酒精擦拭外壁，移入超净台，减少低温细胞复温过程损伤。

稀释离心去除冻存保护剂：将细胞悬液缓慢滴入预加完全培养基的离心管，轻柔吹打混匀，900r/min 离心 5min，离心结束，弃去上层含有 DMSO 的上清，操作轻柔，不要吸走底部细胞沉淀。

重悬制备悬液接种细胞：加入对应完全培养基，温和吹打细胞沉淀，制成均匀单细胞悬液，计数之后按照标准密度接种至 T25 培养瓶，十字摇晃培养瓶，让细胞均匀铺在瓶底，防止局部细胞堆积。

培养箱内静置孵育贴壁：放入细胞培养箱静置孵育，24h 之内尽量不挪动培养瓶，给予平滑肌细胞充足时间完成贴壁伸展，减少细胞悬浮丢失。

换液处理及细胞状态监控：复苏 24h 后首次换液，吸弃旧培养基，清除悬浮死亡细胞，加入预热新鲜培养基；每 2‑3 天更换培养基，显微镜观察长梭形平滑肌细胞形态，观察细胞有无杂菌污染。

细胞传代消化收集：细胞汇合度 70‑80% 开展传代，弃旧培养基，PBS 清洗细胞，加入胰酶消化，镜下观察细胞收缩变圆，立刻加入完全培养基终止消化，收集细胞悬液离心，重悬分瓶扩增；避免细胞过度长满，防止细胞发生表型转换。

1.全程操作需在超净工作台内无菌条件下进行，任何污染风险均可能导致实验失败。

2.培养器皿需提前用0.1mg/ml多聚赖氨酸包被过夜，未包被的培养板细胞贴壁效率极低。

3.细胞生长速率受血清批次影响较大，建议实验前对不同批次血清进行预实验筛选。

4.培养基中需添加20ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)以维持细胞增殖活性。

5.传代时用PBS轻柔洗涤2次后加入0.25%胰蛋白酶，室温作用2-3分钟收集细胞。