产品名称 | 大鼠鼻黏膜成纤维细胞 | 组织来源 | 鼻黏膜组织 |
英文名称 | Rat Nasal Mucosa Fibroblasts | 种属 | 大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3521 |
方法简介 实验室分离的大鼠鼻黏膜成纤维细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠鼻黏膜成纤维细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 大鼠鼻黏膜成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:3
传代特性： 可传5-8代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠鼻黏膜成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：5-7周龄雌性SD大鼠，体重170-210g，每只取材获0.7-1.4×10⁶个细胞，活力>87%
试剂：0.125%胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶、DNase I、透明质酸酶、RPMI-1640培养基
分离纯化步骤
取目标组织用无钙镁PBS洗涤3次，剔除脂肪和结缔组织后剪成小碎片，加入0.125%胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶、DNase I、透明质酸酶消化30-60分钟
滤过100目滤网后的细胞悬液加入等体积含10% FBS的培养基终止消化，400g离心10分钟
采用预混合抗体标记+磁珠分选策略，特异性富集目标细胞，纯度>88%
原代培养要点
细胞重悬于完全培养基中，按3×10⁴密度接种，置于37℃、5% CO₂恒温培养箱
贴壁细胞生长呈接触抑制，融合度达80%时需及时传代，避免过度融合导致细胞老化
常见问题优化
纯度不达标：优化密度梯度离心条件，延长免疫磁珠孵育时间，增加洗涤步骤
细胞形态异常：检查培养基pH值和渗透压，避免过度传代导致细胞老化
目标细胞占比低：优化消化条件提高目标细胞得率，改进分离策略减少非目标细胞污染
大鼠磷酸二酯酶7(PDE7)elisa试剂盒 | MDCK(NBL-2)马-达二氏犬肾细胞 |
大鼠磷酸二酯酶4D(PDE4D)elisa试剂盒 | 人胰腺细胞 Panc 0813(STR鉴定正确) |
大鼠磷酸二酯酶3(PDE3)elisa试剂盒 | 猫肾细胞CRFK（种属鉴定） |
大鼠磷酸二酯酶(PDE)elisa试剂盒 | 人肺腺细胞LC-2/AD (STR鉴定正确) |
大鼠凋亡相关因子(FAS;CD95)elisa试剂盒 | 大鼠滑膜成纤维细胞 |
大鼠凋亡信号调节激酶1(Ask1)elisa试剂盒 | 人小细胞肺 DMS-153 (STR鉴定正确) |
猪白细胞介素18前体（pro-IL-18）elisa试剂盒 | 诱导HT29细胞分化为成熟杯状细胞HT29-MTX-E12(STR鉴定正确) |
PK-13猪肾系细胞专用培养基 | PANK4基因过表达细胞株 |
MCF-7人乳腺癌细胞专用培养基 | FOXA2基因过表达细胞株 |
人原代胆囊动脉内皮细胞专用培养基 | MCMDC2基因过表达细胞株 |
大鼠原代宫颈上皮细胞专用培养基 | GTF2A1L基因过表达细胞株 |
人原代直肠癌细胞专用培养基 | ADGRE3基因过表达细胞株 |
大鼠鼻黏膜成纤维细胞PK-15细胞专用培养基 | FBXO30基因过表达细胞株 |
兔原代膀胱基质成纤维细胞专用培养基 | GPR19基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 准备无菌手术器械（手术剪、镊子、眼科剪）、培养耗材，高压灭菌后备用；超净工作台紫外消毒。
2. 提前配制冰预冷D-Hanks液、消化液（Ⅳ型胶原酶、透明质酸酶）、胰蛋白酶、K-SFM培养基 + EGF + BSA（37℃预热）、双抗溶液。
3. SPF级SD大鼠（200-250g），10%水合氯醛腹腔注射麻醉，所有试剂冰浴预冷备用。
二、取材与预处理
1. 颈椎脱臼处死，碘伏消毒术野，无菌操作取出鼻组织。
2. 浸入冰预冷D-Hanks液中冲洗干净，仔细分离去除血管、神经及结缔组织。
3. 将组织转移至新的培养皿中，用手术剪精细剪碎成细小碎块。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块加入Ⅳ型胶原酶+透明质酸酶混合消化液，37℃消化48min，间断吹打。
2. 加入含10% FBS的培养基终止消化，吹打制备单细胞悬液。
3. 200g离心10min收集细胞沉淀，PBS重悬洗涤两遍。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液过40μm细胞滤网，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除团块和未消化组织。
2. 沉淀细胞用K-SFM培养基 + EGF + BSA重悬，台盼蓝染色检测活力（应>90%），以60000.0-230000.0cells/cm²密度接种。
3. 放入37℃、5% CO2恒温培养箱，每2天换液一次，镜检观察多角形或铺路石样排列，贴壁生长，细胞间紧密连接及生长状态。
关键字： 大鼠鼻黏膜成纤维细胞;鼻黏膜组织;
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