产品名称 | 大鼠毛囊干细胞 | 组织来源 | 毛囊组织 |
英文名称 | Rat Hair Follicle Stem Cells | 种属 | 大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3562 |
方法简介 实验室分离的大鼠毛囊干细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠毛囊干细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 大鼠毛囊干细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5-8代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠毛囊干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：4-6周龄清洁级SD大鼠，体重180-220g，每只可获得0.8-1.5×10⁶个细胞，活力>88%
试剂：0.125%胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶、DNase I、透明质酸酶、DMEM高糖培养基
分离纯化步骤
组织块经Hanks液反复冲洗后剪碎，加入0.125%胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶、DNase I、透明质酸酶于37℃水浴消化30-60分钟，期间间歇振荡
滤过100目滤网后的细胞悬液加入等体积含10% FBS的培养基终止消化，400g离心10分钟
经Percoll不连续密度梯度离心（400g/400g，10分钟）分离纯化目标细胞层
原代培养要点
细胞重悬于完全培养基中，按3×10⁴密度接种，置于37℃、5% CO₂恒温培养箱
干细胞增殖较慢，接种后3-5天可见小集落形成，7-10天可达到传代密度
常见问题优化
细胞形态异常：检查培养基pH值和渗透压，避免过度传代导致细胞老化
细胞贴壁率低：使用合适包被基质（胶原/纤维连接蛋白/多聚赖氨酸），优化接种密度
培养过程中出现污染：严格无菌操作，培养基中添加适量抗生素，定期检测支原体
大鼠硫酸对甲酚(PCS)elisa试剂盒 | KNS-42脑部多形性成釉细胞瘤 |
大鼠磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(pCREB)elisa试剂盒 | 人神经上皮细胞SK-N-MC(STR鉴定正确) |
大鼠增殖细胞核抗原抗体(PCNA)elisa试剂盒 | 人胚肾细胞HEK-293(STR鉴定正确) |
大鼠原钙黏素1(PCDH1)elisa试剂盒 | 人肺腺细胞HCC4006 (STR鉴定正确) |
大鼠对甲酚(p-cresol)elisa试剂盒 | 人肺腺细胞 NCI-H2009(STR鉴定正确) |
大鼠对氧磷酶1(PON1)elisa试剂盒 | 人永生化表皮细胞HaCaT(STR鉴定正确) |
猪白三烯B4（LTB4）elisa试剂盒 | 人骨髓增生异常综合征细胞株 MUTZ-1(STR鉴定正确) |
Marc145非洲绿猴胚胎肾细胞专用培养基 | FBXL4基因过表达细胞株 |
MDA-MB-231+LUC人乳腺癌荧光素酶标记细胞专用培养基 | BCL6B基因过表达细胞株 |
小鼠原代胰岛细胞专用培养基 | ZNF224基因过表达细胞株 |
小鼠原代支气管平滑肌细胞专用培养基 | CYP26B1基因过表达细胞株 |
人原代胰腺星状细胞专用培养基 | GCKR基因过表达细胞株 |
大鼠毛囊干细胞Raji细胞专用培养基 | ELMOD3基因过表达细胞株 |
人原代肺动脉平滑肌细胞专用培养基 | DPF1基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术剪、镊子、培养耗材高压灭菌；超净台紫外通风30min。
2. 配制灌洗液 冰预冷D-Hanks液、消化液（Ⅰ型胶原酶+Dispase II）+胰蛋白酶、α-MEM + 10% FBS + 1% 双抗、双抗。
3. SPF级SD大鼠（200-250g），10%水合氯醛腹腔注射麻醉，冰浴预冷所有缓冲液。
二、取材与预处理
1. 颈椎脱臼处死，75%酒精浸泡消毒体表，无菌操作下暴露并摘取皮肤。
2. 置于冰预冷D-Hanks液中反复漂洗，去除血污及附属组织，仔细剔除结缔组织。
3. 将纯化后的皮肤组织用眼科剪尽量剪碎，尽量减小组织块大小以利消化。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块与Ⅰ型胶原酶+Dispase II+胰蛋白酶混合酶液按1:3比例混合，37℃振荡消化35min。
2. 加入含20% FBS的培养基中和酶活性，反复吹打使组织充分分散。
3. 细胞悬液经40μm滤网过滤，1次200g×10min离心洗涤，收集细胞。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经40μm滤网过滤，采用Percoll密度梯度离心富集干细胞，去除未消化组织块。
2. 用α-MEM + 10% FBS + 1% 双抗调整细胞浓度至100000.0cells/mL，接种于预涂明胶的培养皿中。
3. 置于37℃、5% CO2培养箱中培养，每2天换液一次，倒置显微镜下观察细胞贴壁及梭形或多角形，贴壁生长，核质比高，核仁明显。
关键字： 大鼠毛囊干细胞;毛囊组织;
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