产品名称 | 大鼠肺小动脉内皮细胞 | 组织来源 | 肺组织 |
英文名称 | Rat Pulmonary Arteriolar Endothelial Cells | 种属 | 大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3597 |
方法简介 实验室分离的大鼠肺小动脉内皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠肺小动脉内皮细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 大鼠肺小动脉内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 内皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠肺小动脉内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：5-7周龄雌性SD大鼠，体重170-210g，每只取材获0.7-1.4×10⁶个细胞，活力>87%
试剂：中性蛋白酶、胰蛋白酶、弹性蛋白酶、DNA酶、DMEM/F12完全培养基
分离纯化步骤
取材组织经D-Hanks液冲洗后，手工剔除杂质，剪成1-2mm³小块，加入中性蛋白酶、胰蛋白酶、弹性蛋白酶、DNA酶37℃消化30-45分钟
消化产物经100目滤网过滤，PBS洗涤1次，400g离心10分钟收集细胞沉淀
经Percoll不连续密度梯度离心（400g/400g，10分钟）分离纯化目标细胞层
原代培养要点
调整细胞浓度至1-2×10⁵，接种于胶原/纤维连接蛋白包被的培养皿中，37℃、5% CO₂培养
内皮细胞呈鹅卵石样铺路石状排列，贴壁后24小时内开始伸展，48小时形成单层
常见问题优化
细胞形态异常：检查培养基pH值和渗透压，避免过度传代导致细胞老化
细胞生长缓慢：检查血清批次质量，补充必要生长因子，确保CO₂浓度和温度稳定
目标细胞占比低：优化消化条件提高目标细胞得率，改进分离策略减少非目标细胞污染
大鼠磷酸化凋亡信号调节激酶1(p-Ask1)elisa试剂盒 | MOG-G-CCM脑部多形性成釉细胞瘤 |
大鼠蛋白酶激活受体2(PAR2)elisa试剂盒 | 人小细胞肺细胞NCI-H2286(STR鉴定正确) |
大鼠前列腺酸性磷酸酶(PAP)elisa试剂盒 | 兔主动脉平滑肌细胞CCC-SMC-1（种属鉴定） |
大鼠抗中性粒细胞核周抗体(pANCA)elisa试剂盒 | 人肺鳞细胞NCI-H226(STR鉴定正确) |
大鼠多聚组氨酸标签(HIS-Tag)elisa试剂盒 | 人卵巢细胞HO-8910（STR鉴定正确) |
大鼠多配体蛋白聚糖3(Syndecan-3)elisa试剂盒 | 大鼠肺泡巨噬细胞NR8383（种属鉴定） |
猪β微球蛋白（β-MG）elisa试剂盒 | 人葡萄膜黑色92-1(STR鉴定正确) |
NCI-H1975人肺腺癌细胞专用培养基 | CCR9基因过表达细胞株 |
MDA-MB-435S人黑素瘤细胞专用培养基 | BTBD18基因过表达细胞株 |
小鼠原代外根鞘细胞专用培养基 | CYP46A1基因过表达细胞株 |
小鼠原代肾上腺髓质细胞专用培养基 | CERS6基因过表达细胞株 |
人原代羊水干细胞专用培养基 | WDR27基因过表达细胞株 |
大鼠肺小动脉内皮细胞RD细胞专用培养基 | ACSM6基因过表达细胞株 |
兔原代海绵体内皮细胞专用培养基 | SLC39A12基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术剪、镊子、培养耗材高压灭菌；超净台紫外通风30min。
2. 配制灌洗液 冰预冷D-Hanks液、消化液（Ⅳ型胶原酶+透明质酸酶）+弹性蛋白酶、DMEM/F12 + 20% FBS + 50μg/mL 肝素 + 1% 双抗、双抗。
3. SPF级SD大鼠（200-250g），10%水合氯醛腹腔注射麻醉，冰浴预冷所有缓冲液。
二、取材与预处理
1. 颈椎脱臼处死，75%酒精浸泡消毒体表，无菌操作下暴露并摘取肺。
2. 置于冰预冷D-Hanks液中反复漂洗，去除血污及附属组织，仔细剔除结缔组织。
3. 将纯化后的肺组织用眼科剪尽量剪碎，尽量减小组织块大小以利消化。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块与Ⅳ型胶原酶+透明质酸酶+弹性蛋白酶混合酶液按1:3比例混合，37℃振荡消化47min。
2. 加入含20% FBS的培养基中和酶活性，反复吹打使组织充分分散。
3. 细胞悬液经40μm滤网过滤，1次200g×10min离心洗涤，收集细胞。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经40μm滤网过滤，采用Percoll密度梯度离心纯化内皮细胞，去除未消化组织块。
2. 用DMEM/F12 + 20% FBS + 50μg/mL 肝素 + 1% 双抗调整细胞浓度至120000.0cells/mL，接种于预涂胶原的培养皿中。
3. 置于37℃、5% CO2培养箱中培养，每2-3天换液一次，倒置显微镜下观察细胞贴壁及鹅卵石样铺路石状排列，贴壁生长，细胞边界清晰。
关键字： 大鼠肺小动脉内皮细胞;肺组织;
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