检测原理:

1、预包被板上固定有25羟基维生素D2(25 HVD2)特异性捕获抗体。
2、样本中的25-hydroxy vitamin D2,25 HVD2与包被抗体结合再加入酶标检测抗体形成“包被抗体-抗原-酶标抗体”三明治复合物。
3、加入HRP底物液发生显色反应颜色深浅与样本中25-hydroxy vitamin D2,25 HVD2含量成正比。
4、终止反应后在450nm波长下读取吸光度值通过标准曲线即可精准计算样本中25-hydroxy vitamin D2,25 HVD2的浓度。
产品名称:25羟基维生素D2(25 HVD2)ELISA试剂盒
英文名称:25-hydroxy vitamin D2,25 HVD2 ELISA kit
产品货号:BKE11962
检测种属:
检测类型:双抗体夹心法测抗原
规格:96T/48T
存储条件:2-8℃避光密封保存
有效期:6个月
可测样本类型:血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等
ELISA与其他检测方式对比:

为了让你更直观地理解,我为你总结了ELISA的综合特性:
维度 优势表现 潜在风险/劣势
检测能力 灵敏度高 (pg级),特异性强 仅检测抗原量,不知活性
操作体验 标准化,易自动化,高通量 步骤繁琐,耗时长,需多次洗涤
结果准确性 定量准确,重复性好 高浓度样本有钩状效应风险
成本设备 无需大型昂贵仪器 优质试剂盒单价较高
试剂与样本准备阶段:
温度平衡(最容易被忽视的点)
操作: 从冰箱取出的试剂盒(包括标准品、酶标试剂、样品等)必须在室温(18-25℃)下平衡 30 分钟。
后果: 冷试剂直接使用会导致孔内温差,产生冷凝水或非特异性背景,严重影响 OD 值。
试剂配制
洗涤液: 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。
现用现配: 酶标试剂和显色液(如 TMB)对光和热敏感,建议在使用前配制工作液,避免失效。
样本处理
避免溶血: 血清样本如果发生溶血(红细胞破裂),会释放过氧化物酶,导致假阳性或背景过高。
离心去杂质: 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心,去除沉淀和悬浮物,防止堵塞孔底或干扰读数。
稀释倍数: 如果样本浓度过高,超出标准曲线范围,必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。
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ELISA试剂盒的显著优势:

1. 极高的灵敏度与特异性
这是ELISA最核心的竞争力。
高灵敏度:得益于酶催化底物的信号放大作用,ELISA能检测到低浓度甚至皮克级(pg/mL)的目标分子。这对于检测血清中微量的细胞因子、激素或早期疾病标志物至关重要。
高特异性:特别是双抗体夹心法(最常用的方法),利用捕获抗体和检测抗体双重识别抗原的不同表位,极大降低了非特异性结合和交叉反应的风险,确保结果的准确性。
2. 高通量与高效率
批量处理:标准的ELISA板通常是96孔或384孔格式,非常适合同时处理大量样本(如大规模筛查)。
自动化兼容:操作流程标准化,极易与自动洗板机、酶标仪等设备配合,减少人为误差,显著提升实验效率。
3. 样本适用性广且无需复杂纯化
多样本类型:可以直接检测血清、血浆、尿液、细胞培养上清液、组织裂解液等多种复杂样本,通常不需要预先纯化抗原。
定量分析:通过标准曲线,可以精确计算样本中目标分子的浓度,提供定量的生物学数据。
4. 安全且成本相对可控
安全性:与放射免疫分析法(RIA)不同,ELISA使用酶标记而非放射性同位素,避免了辐射危害,试剂处理更安全。
设备门槛低:除了酶标仪外,不需要昂贵的大型精密仪器(如流式细胞仪或质谱仪),普通实验室即可开展。
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