正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE,EC3.1.1.7)是生物体内关键的丝氨酸水解酶,核心功能是调
控胆碱能神经信号传导,通过特异性水解神经递质乙酰胆碱,终止突触信号传递过程。AChE的催化机制
与活性中心结构在不同物种间高度保守,是研究神经递质稳态调控、精神神经活性分子筛选及害虫神经毒
性防控的重要靶点。同时,昆虫AChE是有机磷与氨基甲酸酯类杀虫剂的经典作用靶标,广泛应用于新
型杀虫先导化合物挖掘、植物源农药活性评价及害虫抗性机制研究。
本试剂盒采用苍蝇头部天然AChE,基于经典Ellman比色法建立微量高通量筛选体系,用于评价化
合物的AChE相关抑制活性。通过计算酶活抑制率并拟合IC₅₀值,可直观量化化合物活性强弱,为杀
虫先导物及胆碱能活性小分子提供体外初筛数据。体外酶活结果仅作为初步活性判定依据,阳性候选化合
物仍需结合细胞与活体实验进一步验证。
测定原理:
本实验基于经典Ellman比色法检测AChE活性。以硫代乙酰胆碱为底物,AChE可催化其水解生
成硫代胆碱,硫代胆碱与显色试剂DTNB反应生成黄色TNB阴离子,在412nm处具有特征吸收。吸
光度随时间的上升速率可直观反映AChE酶活水平。当体系存在抑制剂时,AChE催化活性受到抑制,
产物生成速率降低,吸光度增幅下降,据此可定量计算化合物对AChE的抑制活性。
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