兔雪旺氏细胞

兔雪旺氏细胞

从日本大耳白兔的相关组织中分离纯化雪旺氏细胞，采用差速贴壁法获得高纯度细胞群体，在F-12培养基下扩增培养；运用钙成像检测BTB-18, Sox10标志物表达，通过CCK-8增殖实验分析蛋白表达谱，并结合ELISA综合评价细胞表型特征。

产品名称：兔雪旺氏细胞

英文名称： Rabbit Schwann Cells

组织来源： 神经组织

默认种属 ：兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔雪旺氏细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的兔雪旺氏细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 兔雪旺氏细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:3

传代特性： 可传8-10代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔雪旺氏细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

1. 准备无菌手术器械（手术剪、镊子、眼科剪）、培养耗材，高压灭菌后备用；超净工作台紫外消毒。

2. 提前配制冰预冷D-Hanks液、消化液（胶原酶Ⅳ、透明质酸酶）、胰蛋白酶、DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗 + 2mM GlutaMAX（37℃预热）、双抗溶液。

3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉，所有试剂冰浴预冷备用。

二、取材与预处理

1. 空气栓塞法处死，碘伏消毒术野，无菌操作取出神经嵴细胞组织。

2. 浸入冰预冷D-Hanks液中冲洗干净，仔细分离去除血管、神经及结缔组织。

3. 将组织转移至新的培养皿中，用手术剪精细剪碎成细小碎块。

三、细胞分离与消化

1. 组织碎块加入胶原酶Ⅳ+透明质酸酶混合消化液，37℃消化41min，间断吹打。

2. 加入含10% FBS的培养基终止消化，吹打制备单细胞悬液。

3. 200g离心10min收集细胞沉淀，PBS重悬洗涤两遍。

四、纯化与接种培养

1. 细胞悬液过40μm细胞滤网，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除团块和未消化组织。

2. 沉淀细胞用DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗 + 2mM GlutaMAX重悬，台盼蓝染色检测活力（应>90%），以60000.0-210000.0cells/cm²密度接种。

3. 放入37℃、5% CO2恒温培养箱，每2-3天换液一次，镜检观察长梭形或星形，贴壁生长，可形成神经管样结构及生长状态。

取材操作全程在超净台中进行，相应组织取出后尽快去除血管和结缔组织，用含1% P/S的PBS清洗至组织变白，整个过程温度控制在4°C。

培养板需用1%明胶预包被1小时后PBS洗涤3次，晾干备用，未经处理的培养表面会导致旺氏贴壁率低于30%。

该细胞属于贴壁依赖性细胞，体外增殖速度适中，建议每3天更换一次培养基，传代时按1:3比例操作，避免过度融合导致接触抑制。

培养体系中必须补充DMEM含10% FBS、1% P/S和10ng/ml NGF，生长因子浓度需严格按照方案配制，浓度过高可能导致细胞异常分化，浓度过低则细胞增殖受限。

每次换液前应观察细胞形态和密度，弃去旧培养基时动作轻柔沿壁缓慢吸除，避免扰动贴壁细胞层，新培养基预热至38-39°C后使用。