兔骨骼肌卫星细胞

兔骨骼肌卫星细胞

取材自日本大耳白兔的骨骼肌组织，经中性蛋白酶+胶原酶消化获取原代卫星细胞，接种于胶原预包被培养皿中，采用含FGF/bFGF的专用培养基培养；通过免疫细胞化学鉴定vimentin表达特征，划痕愈合实验检测CD90表达水平，并采用药物敏感性实验评估细胞功能状态。 经5次传代后仍保持稳定的表型特征。

产品名称：兔骨骼肌卫星细胞

英文名称： Rabbit Skeletal Muscle Satellite Cells

组织来源： 骨骼肌组织

默认种属 ：兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔骨骼肌卫星细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的兔骨骼肌卫星细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 兔骨骼肌卫星细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:3

传代特性： 可传5-8代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔骨骼肌卫星细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

1. 准备无菌手术器械（手术剪、镊子、眼科剪）、培养耗材，高压灭菌后备用；超净工作台紫外消毒。

2. 提前配制冰预冷D-Hanks液、消化液（胶原酶Ⅰ、Dispase II）、透明质酸酶、DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗（37℃预热）、双抗溶液。

3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉，所有试剂冰浴预冷备用。

二、取材与预处理

1. 空气栓塞法处死，碘伏消毒术野，无菌操作取出肌肉组织。

2. 浸入冰预冷D-Hanks液中冲洗干净，仔细分离去除血管、神经及结缔组织。

3. 将组织转移至新的培养皿中，用手术剪精细剪碎成细小碎块。

三、细胞分离与消化

1. 组织碎块加入胶原酶Ⅰ+Dispase II混合消化液，37℃消化43min，间断吹打。

2. 加入含10% FBS的培养基终止消化，吹打制备单细胞悬液。

3. 200g离心10min收集细胞沉淀，PBS重悬洗涤两遍。

四、纯化与接种培养

1. 细胞悬液过40μm细胞滤网，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除团块和未消化组织。

2. 沉淀细胞用DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗重悬，台盼蓝染色检测活力（应>90%），以60000.0-230000.0cells/cm²密度接种。

3. 放入37℃、5% CO2恒温培养箱，每2-3天换液一次，镜检观察长梭形，贴壁生长，可观察到肌管形成及生长状态。

取材操作全程在超净台中进行，骨组织取出后尽快去除血管和结缔组织，用含1% P/S的PBS清洗至组织变白，整个过程温度控制在4°C。

培养皿需用胶原蛋白-I型(5μg/cm2)包被过夜，次日PBS洗涤3次后使用，未包被表面骼肌卫星难以正常贴附和铺展。

该细胞为贴壁型细胞，体外培养条件下可稳定增殖，建议每2-3天换液，传代比例1:3，培养温度严格控制在38-39°C。

培养基中必须含有DMEM/F12含20% FBS、1% P/S和2ng/ml FGF-2，其中重组生长因子需分装保存于-80°C避免反复冻融，每次使用新鲜稀释至工作浓度以保证实验可重复性。

换液前先用倒置显微镜观察细胞贴壁情况和形态特征，确认无污染后缓慢吸除旧培养基，沿壁缓慢加入预热的新鲜培养基，避免直接冲洗细胞层。