兔多巴胺神经元细胞

兔多巴胺神经元细胞

从新西兰大白兔的相关组织中分离纯化细胞，采用密度梯度离心法获得高纯度细胞群体，在DMEM/F12+10% FBS+1%双抗下扩增培养；运用数字PCR(dPCR)检测vimentin, SSEA-1标志物表达，通过ELISA分析蛋白表达谱，并结合ROS检测综合评价细胞表型特征。

产品名称：兔多巴胺神经元细胞

英文名称： Rabbit Dopaminergic Neurons

组织来源： 脑组织

默认种属 ：兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔多巴胺神经元细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的兔多巴胺神经元细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 兔多巴胺神经元细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 神经元样

传代比例： -

传代特性： 不传代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔多巴胺神经元细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

1. 手术器械（剪刀、镊子、止血钳）及培养耗材经121℃高压灭菌20min；超净台紫外照射30min。

2. 配制冰预冷D-Hanks液、Ⅳ型胶原酶+胰蛋白酶混合消化液、Neurobasal Medium + B27 + 1% 双抗 + 2mM GlutaMAX、胎牛血清、双抗，全部冰浴预冷。

3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉处理。

二、取材与预处理

1. 空气栓塞法处死，体表酒精消毒，暴露目标组织器官。

2. 无菌条件下摘取脑组织，冰预冷D-Hanks液漂洗去除血液及杂质，去除周围结缔组织和脂肪。

3. 眼科剪将组织剪碎至1mm³小块，转入离心管。

三、细胞分离与消化

1. 剪碎组织加入Ⅳ型胶原酶消化液，37℃水浴消化39min，期间每隔5-10min振荡吹打。

2. 用含血清培养基终止反应，经200目筛网过滤获取单细胞悬液。

3. 4℃、200g离心10min，弃上清，PBS洗涤两次，重悬细胞沉淀。

四、纯化与接种培养

1. 细胞悬液经40μm滤膜过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除大颗粒杂质。

2. 用Neurobasal Medium + B27 + 1% 双抗 + 2mM GlutaMAX重悬细胞沉淀，调整接种密度后接种至明胶预包被的培养器皿。

3. 37℃、5% CO2培养，每3天换液一次，定期倒置显微镜观察多突起状，贴壁生长，可见神经突延伸及生长情况。

动物取材须在无菌条件下进行，中脑多巴胺能组织获取后迅速转入含抗生素的Hanks液中转运，组织离体时间超过1小时将严重影响巴胺神经元的分离效率和活力。

培养板需用1%明胶预包被1小时后PBS洗涤3次，晾干备用，未经处理的培养表面会导致巴胺神经元贴壁率低于30%。

该细胞为贴壁生长型，体外可传代10-15次，建议每2天换液一次，传代比例控制在1:2以内以维持细胞正常形态和功能。

培养基中应加入DMEM/F12含10% FBS和1%青霉素-链霉素，使用前需预热至38-39°C并预平衡CO2浓度至5%，血清批次更换前需进行预实验验证促生长效果。

培养过程中定期观察培养基pH变化(颜色由红变黄提示需换液)，换液频率根据细胞密度调整，高密度时每日换液一次，低密度时每2-3天换液。