产品名称 | 兔脊髓神经干细胞 | 组织来源 | 脊髓组织 |
英文名称 | Rabbit Spinal Cord Neural Stem Cells | 种属 | 兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3822 |
方法简介 实验室分离的兔脊髓神经干细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔脊髓神经干细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔脊髓神经干细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 悬浮
细胞形态： 圆形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5-8代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔脊髓神经干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：3-4月龄日本大耳兔，体重2.5-3.0kg，单只取材获1.2-2.8×10⁶个细胞，活率>90%
试剂：胶原酶Type I、Dispase II、胰蛋白酶、Hanks平衡盐溶液、DMEM/F12完全培养基
分离纯化步骤
取材组织经D-Hanks液冲洗后，手工剔除杂质，剪成1-2mm³小块，加入胶原酶Type I、Dispase II、胰蛋白酶、Hanks平衡盐溶液37℃消化15-30分钟
滤过70目滤网后的细胞悬液加入等体积含10% FBS的培养基终止消化，300g离心8分钟
采用差速贴壁法去除杂细胞：细胞悬液接种于培养皿2-4小时，收集未贴壁细胞用于后续培养
原代培养要点
调整细胞密度至2×10⁴接种于预处理培养皿，37℃、5% CO₂培养箱培养
干细胞增殖较慢，接种后3-5天可见小集落形成，7-10天可达到传代密度
常见问题优化
纯度不达标：优化密度梯度离心条件，延长免疫磁珠孵育时间，增加洗涤步骤
细胞形态异常：检查培养基pH值和渗透压，避免过度传代导致细胞老化
培养过程中出现污染：严格无菌操作，培养基中添加适量抗生素，定期检测支原体
大鼠金属硫蛋白3(MT3)elisa试剂盒 | AV3hela人宫颈癌细胞 |
大鼠金属硫蛋白(MT)elisa试剂盒 | PC12高分化大鼠肾上腺嗜铬细胞细胞 高分化 |
大鼠MSH同源蛋白1样蛋白(Msx1)elisa试剂盒 | Sp2/0-Ag14小鼠骨髓细胞 |
大鼠甲硫氨酸亚砜还原酶B1(MSRB1)elisa试剂盒 | MEF(C处理)小鼠胚胎成纤维细胞 |
大鼠含NLR家族Pyrin域蛋白1(NLRP1)elisa试剂盒 | K7M2WT (K7M2-wt)小鼠骨肉成骨细胞 |
大鼠含NLR家族Pyrin域蛋白3(NLRP3)elisa试剂盒 | A431(A-431)人表皮细胞 |
小鼠肿瘤坏死因子α受体（TNFαR）elisa试剂盒 | BHK-21(C-13)仓鼠肾成纤维细胞 |
PT-67小鼠源基于MLV-10A1逆转录病毒包装系细胞专用培养基 | ACTR8基因过表达细胞株 |
GT1-1小鼠垂体瘤细胞专用培养基 | GFOD1基因过表达细胞株 |
羊原代肺微血管内皮细胞专用培养基 | WDR24基因过表达细胞株 |
Bel-7402细胞专用培养基 | CYP26C1基因过表达细胞株 |
人原代冠状动脉平滑肌细胞专用培养基 | PPM1E基因过表达细胞株 |
兔脊髓神经干细胞V79细胞专用培养基 | SARM1基因过表达细胞株 |
BHT101细胞专用培养基 | F13A1基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术剪、镊子、培养耗材高压灭菌；超净台紫外通风30min。
2. 配制灌洗液 冰预冷D-Hanks液、消化液（Ⅳ型胶原酶+胰蛋白酶）+DNA酶Ⅰ、Neurobasal Medium + B27 + 1% 双抗 + 2mM GlutaMAX、双抗。
3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射，冰浴预冷所有缓冲液。
二、取材与预处理
1. 空气栓塞法处死，75%酒精浸泡消毒体表，无菌操作下暴露并摘取脑。
2. 置于冰预冷D-Hanks液中反复漂洗，去除血污及附属组织，仔细剔除结缔组织。
3. 将纯化后的脑组织用眼科剪尽量剪碎，尽量减小组织块大小以利消化。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块与Ⅳ型胶原酶+胰蛋白酶+DNA酶Ⅰ混合酶液按1:3比例混合，37℃振荡消化44min。
2. 加入含20% FBS的培养基中和酶活性，反复吹打使组织充分分散。
3. 细胞悬液经40μm滤网过滤，2次200g×10min离心洗涤，收集细胞。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经40μm滤网过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除未消化组织块。
2. 用Neurobasal Medium + B27 + 1% 双抗 + 2mM GlutaMAX调整细胞浓度至140000.0cells/mL，接种于预涂明胶的培养皿中。
3. 置于37℃、5% CO2培养箱中培养，每3天换液一次，倒置显微镜下观察细胞贴壁及多突起状，贴壁生长，可见神经突延伸。
关键字： 兔脊髓神经干细胞;脊髓组织;
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