兔关节囊成纤维细胞

兔关节囊成纤维细胞

以日本大耳白兔为实验来源，经胰蛋白酶消化法处理关节囊组织后，通过免疫磁珠阳性分选纯化获得成纤维细胞，采用IMDM培养基培养；通过Nanostring数字计数检测CD90阳性率，共聚焦显微镜观察定量vimentin表达量，结合凋亡检测(Annexin V/PI)综合评价细胞表型。 细胞形态经倒置显微镜观察符合成纤维细胞典型形态特征。

产品名称：兔关节囊成纤维细胞

英文名称： Rabbit Joint Capsule Fibroblasts

组织来源： 关节组织

默认种属 ：兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔关节囊成纤维细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的兔关节囊成纤维细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 兔关节囊成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:3

传代特性： 可传5-8代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔关节囊成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

1. 手术器械（剪刀、镊子、止血钳）及培养耗材经121℃高压灭菌20min；超净台紫外照射30min。

2. 配制冰预冷D-Hanks液、胶原酶Ⅰ+胶原酶Ⅱ混合消化液、DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗、胎牛血清、双抗，全部冰浴预冷。

3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉处理。

二、取材与预处理

1. 空气栓塞法处死，体表酒精消毒，暴露目标组织器官。

2. 无菌条件下摘取关节组织，冰预冷D-Hanks液漂洗去除血液及杂质，去除周围结缔组织和脂肪。

3. 眼科剪将组织剪碎至1mm³小块，转入离心管。

三、细胞分离与消化

1. 剪碎组织加入胶原酶Ⅰ消化液，37℃水浴消化36min，期间每隔5-10min振荡吹打。

2. 用含血清培养基终止反应，经200目筛网过滤获取单细胞悬液。

3. 4℃、200g离心10min，弃上清，PBS洗涤两次，重悬细胞沉淀。

四、纯化与接种培养

1. 细胞悬液经40μm滤膜过滤，采用差速贴壁法去除杂质细胞，去除大颗粒杂质。

2. 用DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗重悬细胞沉淀，调整接种密度后接种至胶原预包被的培养器皿。

3. 37℃、5% CO2培养，每2-3天换液一次，定期倒置显微镜观察长梭形或纺锤形，贴壁生长，细胞核大而圆，核仁明显及生长情况。

新西兰大白兔经戊巴比妥钠(30mg/kg)耳缘注射后，无菌操作下取出关节囊组织，迅速去除周围脂肪组织和结缔组织，用预冷HBSS洗涤3次备用。

实验前培养器皿需用0.5%明胶溶液包被1小时，PBS冲洗后晾干使用，该步骤对节囊成纤维的贴壁和增殖至关重要。

该细胞具有贴壁生长特性，培养过程中需维持培养基pH在7.2-7.4之间，每2天更换新鲜培养基，传代时采用0.25%胰蛋白酶消化。

培养基中应加入DMEM/F12含10% FBS和1%青霉素-链霉素，使用前需预热至38-39°C并预平衡CO2浓度至5%，血清批次更换前需进行预实验验证促生长效果。

每次换液前应观察细胞形态和密度，弃去旧培养基时动作轻柔沿壁缓慢吸除，避免扰动贴壁细胞层，新培养基预热至38-39°C后使用。