产品名称 | 兔瘢痕疙瘩成纤维细胞 | 组织来源 | 皮肤组织 |
英文名称 | Rabbit Keloid Fibroblasts | 种属 | 兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3865 |
方法简介 实验室分离的兔瘢痕疙瘩成纤维细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔瘢痕疙瘩成纤维细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔瘢痕疙瘩成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:3
传代特性： 可传5-8代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔瘢痕疙瘩成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：2-3月龄新西兰大白兔，体重2.0-2.5kg，每只可获得1.5-3.0×10⁶个细胞，活力>88%
试剂：0.125%胰蛋白酶、Ⅰ型胶原酶、DNase I、BSA、DMEM高糖培养基
分离纯化步骤
取材组织经PBS清洗去除血液和杂质，剪碎至1mm³大小，加入0.125%胰蛋白酶、Ⅰ型胶原酶、DNase I、BSA于37℃振荡消化30-60分钟
滤过100目滤网后的细胞悬液加入等体积含10% FBS的培养基终止消化，400g离心10分钟
经Percoll不连续密度梯度离心（400g/400g，10分钟）分离纯化目标细胞层
原代培养要点
细胞重悬于完全培养基中，按3×10⁴密度接种，置于37℃、5% CO₂恒温培养箱
贴壁细胞生长呈接触抑制，融合度达80%时需及时传代，避免过度融合导致细胞老化
常见问题优化
细胞贴壁率低：使用合适包被基质（胶原/纤维连接蛋白/多聚赖氨酸），优化接种密度
纯度不达标：优化密度梯度离心条件，延长免疫磁珠孵育时间，增加洗涤步骤
培养过程中出现污染：严格无菌操作，培养基中添加适量抗生素，定期检测支原体
大鼠巨噬细胞炎性蛋白5(MIP-5;CCL15)elisa试剂盒 | LCC (STR)人喉癌细胞 |
大鼠巨噬细胞炎性蛋白1β (MIP-1β )elisa试剂盒 | KO52白血 |
大鼠巨噬细胞炎性蛋白1(MIP-1)elisa试剂盒 | U87MG+RFP人脑星形胶质母细胞+RFP |
大鼠盐酸二甲双胍(MHy)elisa试剂盒 | SW948人腺细胞 |
大鼠琥珀酸氧化酶(SOX)elisa试剂盒 | SNB-19人脑胶质 |
大鼠花生四烯酸5-脂氧合酶(alox5)elisa试剂盒 | C6+LUC大鼠胶质细胞 |
小鼠脂蛋白α（Lp-α）elisa试剂盒 | Y79人视网膜母细胞细胞 |
TM3小鼠睾丸间质细胞专用培养基 | CRY2基因过表达细胞株 |
L Wnt-3A小鼠皮下结缔组织细胞专用培养基 | DNAAF1基因过表达细胞株 |
羊原代乳腺上皮细胞专用培养基 | HAO1基因过表达细胞株 |
C918细胞专用培养基 | BRS3基因过表达细胞株 |
人原代肝动脉内皮细胞专用培养基 | E4F1基因过表达细胞株 |
兔瘢痕疙瘩成纤维细胞大鼠原代Ⅱ型肺泡上皮细胞专用培养基 | SLC6A16基因过表达细胞株 |
Calu-1细胞专用培养基 | A4GNT基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 准备无菌手术器械（手术剪、镊子、眼科剪）、培养耗材，高压灭菌后备用；超净工作台紫外消毒。
2. 提前配制冰预冷D-Hanks液、消化液（Ⅰ型胶原酶、Dispase II）、胰蛋白酶、DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗（37℃预热）、双抗溶液。
3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉，所有试剂冰浴预冷备用。
二、取材与预处理
1. 空气栓塞法处死，碘伏消毒术野，无菌操作取出皮肤组织。
2. 浸入冰预冷D-Hanks液中冲洗干净，仔细分离去除血管、神经及结缔组织。
3. 将组织转移至新的培养皿中，用手术剪精细剪碎成细小碎块。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块加入Ⅰ型胶原酶+Dispase II混合消化液，37℃消化41min，间断吹打。
2. 加入含10% FBS的培养基终止消化，吹打制备单细胞悬液。
3. 200g离心10min收集细胞沉淀，PBS重悬洗涤两遍。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液过40μm细胞滤网，采用差速贴壁法去除杂质细胞，去除团块和未消化组织。
2. 沉淀细胞用DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗重悬，台盼蓝染色检测活力（应>90%），以60000.0-210000.0cells/cm²密度接种。
3. 放入37℃、5% CO2恒温培养箱，每2-3天换液一次，镜检观察长梭形或纺锤形，贴壁生长，细胞核大而圆，核仁明显及生长状态。
关键字： 兔瘢痕疙瘩成纤维细胞;皮肤组织;
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