鸡脂肪干细胞

鸡脂肪干细胞

取材自白来航鸡的脂肪组织，经组织块贴壁法获取原代干细胞，接种于胶原预包被培养皿中，采用RPMI-1640培养基培养；通过co-IP鉴定CD133表达特征，ROS检测检测Nanog表达水平，并采用线粒体功能实验评估细胞功能状态。

产品名称：鸡脂肪干细胞

英文名称： Chicken Adipose-derived Stem Cells

组织来源： 脂肪组织

默认种属 ：鸡

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的鸡脂肪干细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的鸡脂肪干细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 鸡脂肪干细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:3

传代特性： 可传10代以上

消化液： 0.25%胰蛋白酶

鸡脂肪干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

1. 手术剪、镊子、培养耗材高压灭菌；超净台紫外通风30min。

2. 配制灌洗液 冰预冷PBS液、消化液（胶原酶Ⅰ+BSA）+透明质酸酶、DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗、双抗。

3. SPF级鸡胚（EGK阶段鸡胚），42℃水浴灭活，冰浴预冷所有缓冲液。

二、取材与预处理

1. 无菌条件下取胚组织，75%酒精浸泡消毒体表，无菌操作下暴露并摘取脂肪。

2. 置于冰预冷PBS液中反复漂洗，去除血污及附属组织，仔细剔除结缔组织。

3. 将纯化后的脂肪组织用眼科剪尽量剪碎，尽量减小组织块大小以利消化。

三、细胞分离与消化

1. 组织碎块与胶原酶Ⅰ+BSA+透明质酸酶混合酶液按1:3比例混合，39℃振荡消化38min。

2. 加入含20% FBS的培养基中和酶活性，反复吹打使组织充分分散。

3. 细胞悬液经40μm滤网过滤，2次200g×10min离心洗涤，收集细胞。

四、纯化与接种培养

1. 细胞悬液经40μm滤网过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除未消化组织块。

2. 用DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗调整细胞浓度至130000.0cells/mL，接种于预涂明胶的培养皿中。

3. 置于39℃、5% CO2培养箱中培养，每2-3天换液一次，倒置显微镜下观察细胞贴壁及圆形，贴壁生长，胞质内可见脂滴空泡。

取材操作全程在超净台中进行，脂肪组织取出后尽快去除血管和结缔组织，用含1% P/S的PBS清洗至组织变白，整个过程温度控制在4°C。

实验前培养器皿需用0.5%明胶溶液包被1小时，PBS冲洗后晾干使用，该步骤对肪干的贴壁和增殖至关重要。

该细胞贴壁生长，增殖较为缓慢，每3-4天换液一次，传代比例建议1:2至1:4，长期培养需注意细胞衰老标记物的检测。

培养基中必须含有DMEM/F12含10% FBS和1%青霉素-链霉素，其中重组生长因子需分装保存于-80°C避免反复冻融，每次使用新鲜稀释至工作浓度以保证实验可重复性。

日常维护中需每日检查细胞形态和培养基颜色，出现浑浊或颜色异常应立即换液并排查污染，传代后24小时内避免换液以利于细胞贴附恢复。