鸡主动脉平滑肌细胞

鸡主动脉平滑肌细胞

基于密度梯度离心联合免疫磁珠分选技术从SPF级鸡胚主动脉组织中分离原代平滑肌细胞，在专用培养液中培养扩增；利用免疫电镜结合代谢组学分析对Desmin, SM-MHC进行多参数检测，并通过蛋白质印迹验证目标蛋白的表达与功能。 经6次传代后仍保持稳定的表型特征。

产品名称：鸡主动脉平滑肌细胞

英文名称： Chicken Aortic Smooth Muscle Cells

组织来源： 主动脉组织

默认种属 ：鸡

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的鸡主动脉平滑肌细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的鸡主动脉平滑肌细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 鸡主动脉平滑肌细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 平滑肌样

传代比例： 1:3

传代特性： 可传5-8代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

鸡主动脉平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

1. 准备无菌手术器械（手术剪、镊子、眼科剪）、培养耗材，高压灭菌后备用；超净工作台紫外消毒。

2. 提前配制冰预冷PBS液、消化液（Ⅳ型胶原酶、弹性蛋白酶）、透明质酸酶、DMEM + 10% FBS + 1% 双抗（39℃预热）、双抗溶液。

3. SPF级鸡胚（EGK阶段鸡胚），42℃水浴灭活麻醉，所有试剂冰浴预冷备用。

二、取材与预处理

1. 无菌条件下取胚组织，碘伏消毒术野，无菌操作取出心脏组织。

2. 浸入冰预冷PBS液中冲洗干净，仔细分离去除血管、神经及结缔组织。

3. 将组织转移至新的培养皿中，用手术剪精细剪碎成细小碎块。

三、细胞分离与消化

1. 组织碎块加入Ⅳ型胶原酶+弹性蛋白酶混合消化液，39℃消化41min，间断吹打。

2. 加入含10% FBS的培养基终止消化，吹打制备单细胞悬液。

3. 200g离心10min收集细胞沉淀，PBS重悬洗涤两遍。

四、纯化与接种培养

1. 细胞悬液过40μm细胞滤网，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除团块和未消化组织。

2. 沉淀细胞用DMEM + 10% FBS + 1% 双抗重悬，台盼蓝染色检测活力（应>90%），以60000.0-210000.0cells/cm²密度接种。

3. 放入39℃、5% CO2恒温培养箱，每2-3天换液一次，镜检观察梭形或纺锤形，贴壁生长，呈峰窝状排列及生长状态。

SPF级鸡胚(EGF)经N/A(胚培养)后，无菌操作下取出动脉血管组织，迅速去除周围脂肪组织和结缔组织，用预冷HBSS洗涤3次备用。

实验前培养器皿需用0.5%明胶溶液包被1小时，PBS冲洗后晾干使用，该步骤对动脉平滑肌的贴壁和增殖至关重要。

该细胞具有贴壁生长特性，培养过程中需维持培养基pH在7.2-7.4之间，每2天更换新鲜培养基，传代时采用0.25%胰蛋白酶消化。

培养基配方中DMEM含10% FBS和1%青霉素-链霉素为必需组分，添加顺序和方式需严格按照SOP操作，错误的添加顺序可能导致生长因子失活或沉淀形成。

换液操作全程注意无菌操作，使用经0.22μm滤膜过滤的新鲜培养基，加入后轻摇培养皿使培养基均匀分布，避免产生气泡影响细胞生长。