糖皮质激素诱导肿瘤坏死因子受体(GITR)ELISA试剂盒

试剂盒预先包被糖皮质激素诱导肿瘤坏死因子受体(GITR)捕获抗体的微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤后,用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化为蓝色,在酸的作用下最终转化为黄色,颜色深浅与样本中Glucocorticoid Induced Tumor Necrosis Factor Receptor(GITR)ELISA Kit的含量呈正相关。
产品名称 | 糖皮质激素诱导肿瘤坏死因子受体(GITR)ELISA试剂盒 | 规格 | 48T/96T |
英文名称 | Glucocorticoid Induced Tumor Necrosis Factor Receptor(GITR)ELISA Kit | 货号 | BKE13156 |
保存条件 | 2~8℃低温冷藏 | 保质期 | 6个月 |

1、血清:室温血液自然凝固10-20分钟,2000-3000转/分离心20分钟收集上清。
2、血浆:用EDTA或柠檬酸钠抗凝,混匀10-20分钟后2000-3000转/分离心20分钟取上清。
3、组织标本:称重后加pH7.4的PBS匀浆,液氮速冻后融化,2000-3000转/分离心20分钟取上清。
4、样本采集后24小时内完成检测,暂不检测可分装-20℃冻存,避免反复冻融。
操作步骤:
1、所有试剂提前从冰箱取出,平衡至室温后再使用,浓洗涤液盐析出时可37℃水浴助溶稀释。
2、设置标准品孔、待测样本孔,每孔分别加入梯度标准品或处理好的待测样本100μL,37℃孵育90分钟。
3、弃去孔内液体,不用洗涤,直接加入新鲜稀释的生物素化抗体工作液100μL,37℃孵育60分钟。
4、弃去液体后洗板3次,每次浸泡1-2分钟,拍干后加入酶结合物工作液100μL,37℃避光孵育30分钟。
5、弃去液体后洗板5次,每孔加入底物溶液90μL,37℃避光孵育10-20分钟,可见孔内出现蓝色梯度。
6、每孔快速加入终止液50μL,颜色由蓝立即转为黄色,15分钟内用酶标仪在450nm波长读取OD值。

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一、全程避免样本溶血:红细胞破裂释放的内源性过氧化物酶,会直接干扰HRP标记抗体的酶促反应,引发非特异性显色,导致结果虚高。
二、样本避免反复冻融:反复冻融导致蛋白降解、聚合,破坏抗原的天然构象,无法被包被抗体和检测抗体识别,定量结果大幅偏低。
不同批号试剂严禁混用:不同批次的捕获抗体、酶标抗体效价存在差异,混用会打破“三明治”免疫复合物的结合比例,直接破坏标准曲线的线性关系。
温育条件严格统一:所有反应孔的温育时间、温度必须完全一致,37℃环境下精准控制孵育时长,避免免疫结合效率不均,导致孔间结果偏差。
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