技术原理
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,CoIP)基于抗原-抗体的特异性相互作用。在CoIP实验中,先将针对诱饵蛋白的抗体与ProteinA/G磁珠结合,再将抗体-磁珠复合物与细胞裂解液孵育,富集纯化诱饵蛋白的同时获取与之互作的蛋白。根据不同目的,下游可联合SDS-PAGE、蛋白质银染、Western Blot、蛋白质谱等技术。
技术应用
(1)蛋白相互作用研究。
(2)蛋白质复合体研究。
(3)诱饵蛋白与捕获蛋白的功能结构域分析。
技术特点
(1)与GST-pulldown相比,CoIP在接近生理的条件下利用特异性抗体进行富集,反应体内的真实互作,但CoIP无法区分直接互作或间接互作。
(2)与酵母双杂交相比,CoIP实验技术在细胞或组织的天然生理环境中进行,不受生物体系限制,可用于动物细胞、植物细胞、原核生物等。
(3)瞬时互作易解离,CoIP实验对瞬时互作不敏感。同时实验受限于特异性抗体,需要诱饵蛋白的特异性抗体或标签抗体。
产品优势
(1)背景信号弱:IgG背景信号弱,对弱相互作用结果判断更友好。
(2)免疫富集效率高:免疫沉淀效率提高5~10倍,对低丰度蛋白更友好。
(3)实验周期短:实验全程<3h。
(4)样本适用广:适用于动物组织、细胞、微生物等。
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申小青