EHA101感受态细胞

产品规格 （CAT#: LM1040）

EHA101：                                                                  100μl/支
pK7WGF2（control vector，10ng/μl )                            10μl
保存条件(保质期)：                                         -80℃（12个月） 

 EHA101感受态细胞基因型

C58 (rif^R) Ti pEHA101 (pTiBo542 D T-DNA) (kan^R) Nopaline

EHA101感受态细胞产品说明

EHA101菌株为C58型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pEHA101 (pTiBo542DT-DNA)，此质粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pEHA101 (pTiBo542DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。pEHA101 (pTiBo542DT-DNA) 型Ti质粒含有筛选标签：kan，赋予EHA101菌株和卡那霉素抗性，适用于玉米、水稻、烟草等植物的转基因操作。本公司生产的EHA101化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pK7WGF2质粒（壮观霉素抗性）检测转化效率>10⁴cfu/μg DNA。

EHA101感受态细胞操作方法

1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。

2.每100 μl感受态加入0.01-1 μg质粒DNA（转化效率较高，次使用前做预实验确定所加质粒的量），用手拨打管底混匀，依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。

3. 加入700 μl无抗生素的LB或YEB液体培养基，于28℃，200 rpm振荡培养2~3小时。

4. 6000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天。

（当平板只含有转化所用双元载体抗生素时，28℃培养48小时即可；平板中同时加入双元载体抗生素，20 μg/ml rif 时，需28℃培养60小时；如果使用的平板含有50 μg/ml rif 则需要28℃培养72-90小时）。