AGL1感受态细胞
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发货地 上海
更新日期 2024-03-25

产品详情

中文名称:AGL1感受态细胞产品类别: 基因 感受态细胞
2024-03-25 AGL1感受态细胞 100 ul /RMB 基因 感受态细胞

产品规格 (CAT#: LM1020)
AGL1:                                                                       100μl/支
pCAMBIA2301(control vector,10ng/μl )                    10μl
保存条件(保质期):                                         -80℃(12个月)

AGL1感受态细胞基因型

C58 RecA (rifR/carbR) Ti pTiBo542DT-DNA Succinamopine

AGL1感受态细胞产品说明

AGL1菌株为C58, RecA型背景,核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif和羧苄青霉素抗性基因carb,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒 pTiBo542DT-DNA,此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件, pTiBo542DT-DNA质粒自身的T-DNA转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。AGL1菌株适用于水稻、拟南芥、杨树等植物的转基因操作。本公司生产的AGL1化学转化感受态细胞经特殊工艺制作,pCAMBIA2301质粒检测转化效率>10cfu/μg DNA。

 

AGL1感受态细胞操作方法

 

 

 

1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化,处于冰水混合状态时插入冰中。

2.每100 μl感受态加入0.01-1 μg质粒DNA(转化效率较高,次使用前做预实验确定所加质粒的量),用手拨打管底混匀,依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
3. 加入700 μl无抗生素的LB或YEB液体培养基,于28℃振荡培养2~3小时。

4. 6000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培养箱培养2-3天

(当平板只含有50 μg/ml kan 时,28℃培养48 h即可;平板中同时加入50 μg/ml kan,20 μg/ml rif 时,需28℃培养60 h;如果使用的平板含有50 μg/ml rif 则需要28℃培养72-90 h)。

 

注意事项

1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10 ;质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,转化效率急剧下降;质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。

2. 混入质粒时应轻柔操作。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. 平板上阳性克隆密度过大时,由于营养不足,阳性克隆生长变慢,菌落变小,为了获得大的菌落,应减少质粒用量。

4. 利福平浓度不应高于25 μg/ml,过高的利福平浓度不利于农杆菌生长,会降低其生长速度和转化效率。本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有50 μg/ml kan,若所用平板含有20 μg/ml rif则转化效率降低到1/2。

5. 培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌;根据所用菌株抗性加入Ti质粒筛选抗生素可防止Ti质粒丢失,但Ti质粒筛选抗生素不利于农杆菌的转基因操作,所以一般培养农杆菌时不考虑这些抗生素,Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。

关键字: AGL1_感受态细胞_基因_

公司简介

上海联迈生物工程有限公司(LMAI Bio)是一家经营生物、仪器、试剂、耗材等科研产品的高新技术生命科学公司,在广大用户的帮助和支持下,经过不懈的努力, 已成为国内生命科学领域产品的一家供应商,代理许多国际先进水平的高科技产品,包括分子生物学、细胞生物学、免疫学、诊 断等多个研究及应用领域。 公司的服务和业务网络遍及全国,在同行获得一致好评。 特别是生物试剂和细胞产品更是种类齐全、价格实惠,美国原装进口原代细胞,专业培养基,常用传统培养基,细胞培养用的相关试剂,氨基酸,抗生素,维他命类产品品种齐全,试剂耗材种类繁多。 公司的规模和产品种类日益扩大和更新,我们一直秉承着代理优质品牌的产品,服务好每一位顾客,将
成立日期 2017-09-26 (7年) 注册资本 100.000000万人民币
员工人数 50-100人 年营业额 ¥ 300万-500万
主营行业 生化试剂,细胞培养,蛋白组学,分子生物学,细胞生物学 经营模式 贸易,工厂,试剂,定制,服务
  • 上海联迈生物工程有限公司
非会员
  • 公司成立:7年
  • 注册资本:100.000000万人民币
  • 企业类型:有限责任公司(自然人独资)
  • 主营产品:技术开发、技术咨询、技术服务、技术转让,仪器仪表、机电设备、机械设备、玻璃制品、电子产品、一类医疗器械
  • 公司地址:上海 上海市松江区新车公路185号上海莘莘学子创业园
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