Rat IL-4 ELISA Kit

      碧云天的Rat IL-4 ELISA Kit (Rat Interleukin-4 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即大鼠白细胞介素4酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测大鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的IL-4的ELISA试剂盒。
      本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为16pg/ml，与GDNF、GM-CSF、IFN-γ、IL-1α、IL-1β、IL-12、IL-6、IL-10、PDGF-BB、TNF-α、人IL-4和小鼠IL-4等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
      IL-4是一种多效应细胞因子，主要由嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞和Th2细胞等多种细胞分泌，在许多细胞中均能够发挥免疫调节功能。IL-4作为B细胞的激活因子，其能够调解B细胞表面免疫球蛋白的分型转换，尤其是IgG和IgE之间的转换。IL-4还能够调控前体辅助T细胞向Th2亚型分化。IL-4与TNF-α协同作用能够诱导血管内皮细胞和平滑肌细胞表面VCAM-1的表达，从而选择性招募嗜酸性粒细胞和淋巴细胞到达炎症部位。同时，IL-4还能下调IL-1,TNF-α和PGE2等炎症因子的产生。此外，IL-4在体内外均表现出了一定的抗肿瘤活性。
      成熟的大鼠IL-4是由147个氨基酸减掉23个氨基酸的信号肽所剩余的124个氨基酸组成，结构上包含4个糖基化位点和7个半胱氨酸残基，其中的6个半胱氨酸残基参与形成3个分子间二硫键，从而保证IL-4活性。成熟的大鼠IL-4分别与小鼠IL-4和人IL-4具有60%和44%的氨基酸同源性。
      IL-4首先与IL-4 Rα亚基结合，之后该复合物与辅助受体链γ_c或IL-13 Rα结合。在JAK的作用下，受体C端发生磷酸化，随后形成二聚体。这一过程导致STAT6被募集并发生磷酸化，磷酸化的STAT6发生构象改变，形成二聚体，转移至细胞核内，对多种靶基因的转录进行调控激活。
      本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中大鼠IL-4的的浓度，其原理见图1。大鼠IL-4特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的大鼠IL-4会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗大鼠IL-4抗体后，生物素化抗大鼠IL-4抗体与大鼠IL-4结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。大鼠IL-4浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中靶蛋白浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

      一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

保存条件：
      除标准品外，4℃保存6个月内有效。标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效。
注意事项：
      由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
      洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
      为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
      TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
      加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
      不宜混用不同批号的试剂盒组份，每批次试剂盒均经过独立测试。
      充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
      本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
      洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
      检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
      加样过程中须避免气泡的产生。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。