名称 DNA退火缓冲液(5×) / Annealing Buffer for DNA Oligos (5×)
规格
PH1417-1 | 1mL
试剂组分
试剂(A): Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)----1ml----Store at -20℃
试剂(B): Nuclease-Free Water----5ml----Store at RT
产品简介
DNA寡核苷酸退火缓冲液(Annealing Buffer for DNA Oligos)简称为DNA退火缓冲液，是一种可用于DNA oligo退火的缓冲液，可用于常规的DNA oligo的退火，尤其适合于较难退火的用于RNAi (也称siRNA)质粒构建的DNA oligo的退火。
Phygene的 Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)能有效避免DNA oligo自身形成发夹结构，并且两条oligo退火后可以直接和经酶切、纯化的质粒连接，转化后可以得到大量的阳性克隆。该本试剂操作简单，只需把待退火的DNA oligo和Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)按照一定比例混合后，置于PCR仪上进行程序降温，约90min即可完成。
使用说明
操作步骤(仅供参考)：
1、 把待退火的DNA oligo用经灭菌的超纯水或Nuclease-Free Water配制成50μM， 同时溶解Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)，混匀备用。
2、 按如下退火反应体系操作：
Nuclease-Free Water----40μl
Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)----20μl
DNA oligo A(50μM)----20μl
DNA oligo B(50μM)----20μl
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Tatal 100μl
按照上述顺序，依次加入并混匀，如果所用PCR仪没有加热盖，可加入Mineral Oil防止 液体挥发。
3、 按如下PCR仪的退火条件：
步骤 温度 时间 作用
1 95℃ 2min Oligo充分变性
2 每90s下降1℃,降至25℃ 约90min 程序退火
3 4℃ 长期保存 暂时存放
注1：如果所用的PCR仪不具备下降0.1℃的功能，也可以设置为每90秒下降1℃。
4、退火后可直接用于连接反应，也可以-20℃冻存备用。如果退火结束后打算进行酶切等其它反应，用纯化试剂盒进行纯化，或者确保退火产物在反应体系中体积不超过5%，以避免Annealing Buffer对后续的酶反应体系的干扰。
注意事项
1、 避免反复冻融，以免效率下降。
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