产品简介
常规的 Tris-SDS-PAGE 电泳的只能分辨大分子蛋白,对于相对分子量小的,尤其是 10 kD 以下的蛋白分辨率极低。而 Tricine-SDS-PAGE 可以很好的分离分子量在 1-10 kD 的蛋白及多肽,成为目前电泳法变性分离多肽的主要方法。
本产品包括 Tricine-SDS- PAGE 凝胶制备所需全套试剂,只需自备蒸馏水,即可制备高质量各种浓度的凝胶,方便、
快捷,电泳后可直接用于考染、银染、Western 杂交等实验。
注意事项
1、10% PAGE 胶凝固剂配制后分装-20℃保存。该溶液不稳定,应尽量减少室温存放时间,每次取用后立即放回冰箱,以防失效;若发现凝胶聚合时间延长,应考虑更换,使用-20℃保存的 10% PAGE 胶凝固剂。
2、在凝胶配制过程中,尤其是液体混匀步骤,应尽量避免气泡的产生。
3、在分离胶上层加蒸馏水时要小心操作,加水时速度不能太快。
4、Acr/Bis 具有神经毒性,操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。
5、本产品仅用于科研,不能用于人体实验或其它用途。
本产品所提供的 PAGE 胶凝固剂为固体粉末,使用前加入双蒸水溶解即配制成 10% PAGE 胶凝固剂溶液(比如将0.5g
PAGE 胶凝固剂加 5ml 双蒸水),将溶液分装后置于-20℃保存,通常半年内有效。溶液在使用中可放置 4℃保存两周。
I 配制分离胶
1、将不同体积的双蒸水、49.5%T 6%C 、凝胶缓冲液和甘油加入到离心管中混合。
2、加入 10% PAGE 胶凝固剂和 PAGE 胶促凝剂,立即涡旋混匀 5-10 秒,以使溶液充分混匀。
3、在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液(1 mm mini-gel,分离胶溶液加约 4 ml ),然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3 cm 的水层,使凝胶表面保持平整。
4、静置,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
II 配制夹层胶
去除覆盖在分离胶上的水层,用滤纸将残留的水尽量吸去。
1、将不同体积的双蒸水、49.5%T 3%C 和凝胶缓冲液加入到离心管中混合。
2、加入 10% PAGE 胶凝固剂和 PAGE 胶促凝剂,立即涡旋混匀 5-10 秒,以使溶液充分混匀。
3、将适量的夹层胶溶液迅速加至分离胶的上面(对于 1 mm 的 mini-gel,夹层胶溶液加约 1 ml ), 然后在夹层胶溶液上轻轻覆盖一层水层,使凝胶表面保持平整。
4、静置,待夹层胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
III 配制浓缩胶
去除覆盖在夹层胶上的水层,用滤纸将残留的水吸去。
1、将不同体积的双蒸水、49.5%T 3%C 和凝胶缓冲液加入到离心管中混合。
2、加入 10% PAGE 胶凝固剂和 PAGE 胶促凝剂,立即涡旋混匀 5-10 秒,以使溶液充分混匀。
3、将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。
4、待凝胶聚合后,小心地拔出梳子,以免破坏加样孔。
5、进行电泳操作。
IV 电泳
将电泳槽放入 4℃或冰水浴中,外槽加入阳极缓冲液,内槽加入阴极缓冲液,30V 预电泳 10min,将样品(已经过 Tricine 上样缓冲液处理)加入点样孔后 30V 电泳 1 小时,100V 电泳至溴酚蓝到达胶底部后停止电泳,进行后续的考马斯亮蓝染色或电转。
配胶说明:
根据目的蛋白分子量大小选择合适的 PAGE 分离胶配制浓度,凝胶浓度配方参考附表。
关键字: 凝胶制备试剂盒
康迪斯化工(湖北)有限公司是一家立足于生命科学领域有自主知识产权的高新技术企业,主要从事生物试剂的研发与生产,并以持续探索和开发生命科学技术为动力,致力于为科研工作者提供实用、高效的科研试剂,为生命科学的研究与发展提供有意义的帮助。