细胞系
溶解方法
可以溶于DMSO或DMF。
反应时间
50 mM，25℃ 反应1 h
应用
用DMSO配置浓度为50mM的biotin-HPDP，然后用DMF 将其稀释成终浓度为4 mM的溶液。蛋白样品溶液与biotin-HPDP溶液体积比按照1：3混合后25℃孵育1小时，最后用抗坏血酸溶液（50mM）(抗坏血酸：蛋白样品=1:50)来终止反应。随后，多余的biotin-HPDP可以通过加入两倍体积的丙酮（-20℃）在20℃下孵育20min去除。每毫克蛋白加入15ul的链霉亲和素琼脂糖来纯化生物素化蛋白，室温孵育1h。用10倍体积含NaCl的中性缓冲液清洗磁珠，每次洗脱间隙室温200g离心5秒。用洗脱液与磁珠孵育回收结合的蛋白。用SDS-PAGE以及特定的抗体来分析感兴趣的蛋白。
动物模型
剂量
注意事项
References:
[1.][1].Samie R. Jaffrey and Solomon H. Snyder. The Biotin Switch Method for the Detection of S-Nitrosylated Proteins. Science’s stke.2015.
Biotin-HPDP，一个巯基反应性的生物素化试剂，是一种水不溶性的试剂，在加入反应性水溶液之前需要在合适的溶剂中溶解，包括二甲基亚砜（DMSO）和二甲基甲酰胺（DMF）。Biotin-HPDP由一个双环生物素环结构，一个附着在生物素戊酸侧链上的1,6-二氨基己烷和一个侧链末端的巯基反应性基团共同组成。Biotin-HPDP末端的吡啶基二硫化物能够与蛋白或其它分子上的游离巯基反应形成二硫键，并释放吡啶-2-硫酮。Biotin-HPDP的长侧链使得生物素标记的分子能够更好的与亲和素（avidin）或链霉亲和素（streptavidin）探针结合。
参考文献：Bioconjugate Techniques , 2nd ed. By Greg T.Hermanson (Pierce Biotechnology, Thermo Fisher Scientific, Rockford, IL). Academic Press (an imprint of Elsevier): London, Amsterdam, Burlington, San Diego . 2008. ISBN 978-0-12-370501-3.
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