非冻型血液DNA保存液
产品及特点 本产品是在室温条件下长期保存用于 DNA 提取的血液样品的保存液,它通过裂解细胞并高效抑制 DNase 的活性而达到长期保证 DNA 分子的完整性。 1. 保存时间长,可常温保存血液 DNA 长达六个月,尤其适合于野外血液样品采集。 2. DNA 完整性好,纯化后长度在 20-50 Kb 之间。 3. DNA 无化学修饰,提得的 DNA 可用于酶切、电泳、Southern 杂交和 PCR 等 分子生物学实验。 4. 适用于各种动物血液(包括禽类血液)。 5. 安全可靠,本产品无毒无害。 6. 使用简单,直接把新鲜的血液样品与本产品混合即可。 运输及保存 室温运输及保存,有效期两年。
使用方法 一: 哺乳动物血液(包括人血液) 1. 将抗凝血(1-10 mL)加入到适当容量的塑料离心管中。 2. 加入等体积的血液 DNALOCKER,充分振荡混合均匀。 3. 常温闭光保存直到使用。 4. 提取 DNA 时,可以取出部分液体,用自备的蛋白酶 K(终浓度为 0.1 mg/mL) 37℃处理过夜,然后再用经典的酚/氯仿抽提+乙醇沉淀方法得到 DNA。 二: 禽类血液 1. 由于禽类血液有核细胞量远高于哺乳动物,血液的使用量很少,一般只有哺乳动 物血液用量的 1/100 到 1/1000,所以需先用等体积的水将血液 DNALOCKER 稀释,然后直接将禽类血液加入。其余操作同上。 疑难解答 Q:保存血液样品时温度越低越好吗? A:不是。Tegelstrom 曾比较了分别在-70℃, -20℃, 4℃保存了 6 个月的蛙血,发 现保存温度越低,血液 DNA 的断裂越严重(详见 Tegelstrom, 1989. Cold room Storage of blood may be better than storage at -70℃. Fingerprint News, 4:5-6)。 导致核酸降解的常见非酶因素 原因 机制 溶液中残留重金属离子 磷酸二脂键的断裂 长期存放/光照产生的自由基 磷酸二脂键的断裂 UV 形成嘧叮二聚体 DEPC 使 RNA 中没配对的腺嘌呤羧甲基化,但对 双链核酸危害小 高温和低 pH 脱嘌啉反应(depurination) EB 导致可见光对 DNA 的光氧化 (photooxidation) 酚 其氧化产物使磷酸二脂键断裂 甲酰胺溶液 酸化后(pH 5)引起 RNA 降解 醚 残留过氧化物使磷酸二脂键的断裂 醇 残留重金属离子使磷酸二脂键的断裂 4℃ 短期保存的温度 -20℃ 如果溶液中有盐,将使核酸产生大量断裂 -70℃ 长期保存的温度,但冷凝状态下自由 基的破坏更活跃
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