柱式软体动物DNAout

柱式软体动物DNAout

产品及特点 本产品是专门用于从各种软体动物组织中提取基因组 DNA 的试剂盒。其原理是基于阳离子去垢剂 CTAB 在适当的离子强度条件下，特异地跟基因组 DNA 结合形成沉淀，然后在用硅胶膜技术进行进一步纯化。本产品具有下列特点：

1. 适用于用常规方法难以提取的、各种富含多糖的软体动物动物，包括螺类、贝类、乌贼、章鱼和蜗牛等。

2. 提取到的基因组 DNA 完整性，其中最长可以到达长度一般在 20-50kb。

3. DNA 纯净，OD260/280 一般都在 1.9 左右、DNA 片段大小在 30-50 Kb 左右，可直接用于 PCR、酶切、杂交等。

4. 价廉物美，与国外同类产品相比质量相当，但价格便宜。
规格及成分 成 份 编 号 大纸盒包装 
柱式软体动物溶液 A 101111a 50 mL 柱式软体动物溶液 B 101111b 15 mL(棕色) 柱式软体动物溶液 C 101111c 50 mL 蛋白酶 K 溶液（20 mg/mL） 80911 1 mL 离心吸附柱 60911 50 套 通用洗柱液 60408 50 mL DNA 洗脱液 2.0 111205 10 mL 使用手册 101111sc 1 份 

运输及保存 常温运输和保存，有效期一年。蛋白酶 K 溶液需要低温运输和-20℃保存。

自备试剂 氯仿。

使用方法 

1. 匀浆方法一：称取 0.1-0.3g 软体动物组织，转移到塑料研钵中，液氮研磨成粉后转移到一个干净的 1.5 mL 塑料离心管中。注意：避免使用含二氧化硅的玻璃研钵，因为 DNA 会吸附在表面，影响得率。在离心管中加入 1 mL 溶液A 并用移液枪头充分吹打混匀。进入第三步。

2. 匀浆方法二：将 0.1-0.3g 软体动物组织剪成小块，转移到 10-15mL 塑料管中（培养细菌那种离心管即可），加入 1 mL，用 Polytron 式匀浆机（剪切式匀浆机）匀浆 1 分钟左右。

3. 在样品中加入 20 uL 蛋白酶 K 溶液（20mg/mL），37℃保温 1-3 小时。注意：让反应体系处于摇晃状态，此保温长度一般可以让样品彻底溶化。

4. 加入 0.3 mL 的溶液 B 和 0.2 mL 的自备氯仿，振荡器上振荡 30 秒充分混匀。

5. 12,000 rpm 室温离心 3 分钟，小心将上清转移到新的 1.5 mL 塑料离心管中。

6. 在上清液中加入等体积的溶液 C，上下颠倒 30 秒充分混匀。

7. 将混合液分两次转移到离心吸附柱中。每次是先将 0.7-0.8 mL 混合液转移到离心吸附柱中，室温放置 2 分钟，12,000rpm 室温 1 分钟，弃穿透液。再把剩余的一半上柱，重复此操作。

8. 将 0.7 mL 通用洗柱液加入到离心吸附柱中，12,000 rpm 室温离心半分钟，弃穿透液。

9. 将 0.3 mL 通用洗柱液加入到离心吸附柱中，12,000 rpm 离心半分钟（此步为第二次洗涤，一般可以省略）。

10. 空甩离心吸附柱半分钟去除残留液体。

11. 将离心吸附柱放置在一新的 1.5 mL 塑料离心管中，加入 30uL DNA 洗脱液3.0。

12. 12,000 rpm 离心 1 分钟，管底即为 DNA 溶液，可立即用于浓度测定或 PCR，也可长期保存在-20℃。