填入法DNA探针末端标记试剂盒

填入法DNA探针末端标记试剂盒

原理及特点本产品是基于 DNA 聚合酶能够在 DNA 粘性末端的 3’凹端掺入 dNTP的原理而设计，该反应的示意图如下：本产品是在上述原理的基础上开发的，具有下列特点：

1. 快速，15 分钟即可完成标记反应。

2. 可用于任何 3’凹端的 DNA 片段。

3. 可用同位素底物和非同位素底物（生物素和地高辛标记的核苷酸等）。

4. 提供不带标记核苷酸、带生物素标记核苷酸和带地高辛标记核苷酸三种选择。

5. 同时提供非标记的 dNTP，用户可以根据粘性末端序列使用。

6. 标记的探针可用于电泳迁移率实验（EMSA）、原位杂交（ISH）、NorthernBlot（不推荐用于低丰度 RNA 检测）、小 RNA Northern、Southern Blot（不推荐用于单拷贝基因检测）、菌落杂交、斑点印迹杂交分析等。

7. 本产品足够 5 次 20uL 体系的标记反应。

8. 本产品仅供科研使用。

规格及成分 成 份 编 号 十孔盒包装

Klenow DNA 聚合酶 131235a 10 uL（红盖）

10×Klenow DNA 聚合酶缓冲液 131235b 10 uL（白盖）

dATP 溶液，2.5mM 130912 10 uL（黄盖）

dTTP 溶液，2.5mM 130913 10 uL（绿盖）

dGTP 溶液，2.5mM 130914 10 uL（蓝盖）

dCTP 溶液，2.5mM 130915 10 uL（紫盖）

Biotin-11-dUTP 溶液 120653b 10uL（本色盖仅 B 型）

DIG-11-dUTP 溶液 120653c 10uL（本色盖仅 C 型）

超纯水 100935 1 mL（蓝盖）

使用手册 120653sc 1 份

运输及保存 低温运输，-20℃保存，有效期一年

自备试剂 DNA 模板

使用方法 1. 在 0.2 mL 微量离心管中按下表设置一个 20uL 体系的标记反应（如果需

要标记更多探针，请增加标记体积而不要增加探针 DNA 的浓度）：

成份 用量

待标记 DNA（3’凹陷） 100-200 pmol

Klenow DNA 聚合酶缓冲液，10× 2 uL

自备标记核苷酸（A 型）

或

Biotin-11-dUTP 溶液（B 型）

或

DIG-11-dUTP 溶液（C 型）

1 uL

与标记核苷酸不相同的三种非标记

核苷酸，2.5mM(对 B 型和 C 型，标

记的是 dUTP，相当于 dTTP，因此

应该加 dATP、dCTP 和 dGTP)

各 1uL，共 3uL

Klenow DNA 聚合酶 1 uL

超纯水 补到 20 uL

2. 37℃反应 30 分钟。

3. 70℃ 10 分钟灭活 Klenow DNA 聚合酶。

4. 如果需要，可以用斑点杂交法检测标记效率（本产品不含相关试剂）。

5. 如果是非同位素标记，探针不需纯化可以直接用于杂交。如果需要纯化非

同位素标记的探针，请不要酚/氯仿抽提，因为非同位素标记物一般会使

探针 DNA 进入有机相而丢失。

6. 使用时需将探针以 1-8 ng/uL 的终浓度加入到杂交液中（如果探针是双链 DNA，加入前还需热变性）。如果不立即使用，非同位素标记的探针DNA 可-20℃长期放置一年，同位素标记的探针 DNA 不能放置。