4×核酸液相-液相杂交液
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4×核酸液相-液相杂交液

价格 490
包装 10mL
最小起订量 10mL
发货地 上海
更新时间 2022-08-11

产品详情

中文名称:4×核酸液相-液相杂交液保存条件: 常温运输和保存
纯度规格: 99.99%
2022-08-11 4×核酸液相-液相杂交液 10mL/490RMB 490 常温运输和保存 99.99%

4×核酸液相-液相杂交液

英文名称:
运输:低温
保存:负20℃
有效期:1年
货期:现货
其他:
产品介绍:
用于差减杂交等液相杂交

 

 

使用方法

 

1. 将 50-300mg 昆虫组织放入 10-15 mL 塑料离心管中,加入 1 mL 溶液 A,然后用匀浆器匀浆 5-20 秒。匀浆时会产生泡沫,但不影响提取效果。也可以使用液氮砚磨法破碎昆虫组织,砚磨完后加入 1 mL 溶液 A。注意:溶解溶液 A 沉淀。溶液 A 在 4℃放置后可能会产生沉淀,使用前必须放在 65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。

 

2. 将匀浆物或砚磨物转移至干净的 1.5 mL 塑料离心管中(可以不必转移非液体的细胞碎片)。

 

3. 在离心管中加入 0.3 mL 的溶液 B 和 0.2 mL 自备氯仿,在振荡器上振荡30 秒混匀,此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。

 

4. 室温 12,000 rmp 离心 3-5 分钟,两相间将有约 5-10 毫米厚的细胞破碎物。

 

5. 将上清液(约 0.6 mL)转移到另一干净的 1.5 mL 塑料离心管中,下层有机相和中间层含有 DNA、蛋白质和其他杂质,避免触及或吸取。好留下 100 uL上清液不取。

 

6. 加入等体积的溶液 C,充分颠倒混匀。

 

7. 将一半的溶液转移到离心吸附柱中,12,000 rmp 室温离心半分钟,弃穿透液。

 

8. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中, 12,000 rmp 室温离心半分钟,弃穿透液。

 

9. 加 0.7 mL 通用洗柱液,室温 12,000 rmp 离心半分钟,弃穿透液。

 

10. 加 0.3 mL 通用洗柱液,室温 12,000 rmp 离心半分钟,弃穿透液。此步可以省略。

 

11. 室温 12,000 rmp 离心半分钟。此步十分重要,否则残留的乙醇会影响 RNA的使用。

 

12. 将离心吸附柱转移到 RNase-free 收集管中,加入 50-100 uL RNA 洗脱液,室温放置 1-2 分钟。

 

13. 12,000 rmp 室温离心半分钟,离心管中溶液即为 RNA 样品,可以立即使用或存放于-80℃待用。

 

14. RNA 完整性的电泳检测:如果需要做 Northern 杂交,强烈建议用户使用甲醛变性进行 RNA 电泳,因为非变性胶不能分离所有的 RNA 分子(BioTechniques,28:414,2000)。注意:大部分昆虫的 28S RNA 被切割成两个小的片段,彼此用氢键相连,所以在甲醛变性胶中,没有 28S带出现(文献见:Eva C. Winnebeck,Craig D. Millar and Guy R. Warman,Why does insect RNA look degraded Journal of InsectScience: Vol. 10:1-7)

 

15. RNA 产量产率测定:将 5-10 μL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在 OD260 的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA 浓度(1 OD260 的RNA=40 μg/mL),进而计算出 RNA 的产量(浓度 X 体积)和产率(RNA 产量/组织用量)。

 

16. RNA 纯度测定:无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染,但一般不影响 RT-PCR 等反应。

 

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公司简介

上海泽叶生物科技有限公司是一家服务于生命科学领域的高新技术企业,主要为科研机构、高校、院所及企业产品开发研究提供所需要的科研类试剂、耗材、仪器、技术服务等。包括分子生物学、免疫学、微生物学、细胞学、材料科学,通用试剂、药物合成试剂、手性化合物、催化剂及配体、分析试剂、生物试剂,检测试剂等等
成立日期 2016-08-08 (7年) 注册资本 100万元整
员工人数 1-10人 年营业额 ¥ 100万以内
主营行业 生物化工,有机原料,化学试剂,医药原料,技术服务 经营模式 贸易,试剂,定制,服务
  • 上海泽叶生物科技有限公司
VIP 3年
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  • 企业类型:贸易
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