BeyoAP Alkaline Phosphatase
BeyoAP Alkaline Phosphatase，即BeyoAP碱性磷酸酶，是一种热敏感的，可以催化DNA、RNA、核糖核苷酸和脱氧核糖核苷酸水解释放5′或3′末端磷酸基团的酶，也可以脱去蛋白质丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基上的磷酸基团。BeyoAP Alkaline
Phosphatase是一种新型碱性磷酸酯酶，在信裕生物的各种内切酶和PCR缓冲液中可保持100%活性，对于各种类型的DNA 5′末端的去磷酸化均可在37℃孵育10分钟即可完成，并且75℃孵育5分钟即可完全失活。
碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase, AP/ALP/AKP/ALKP/ALPase/Alk Phos)常被称作碱性磷酸酯酶(EC 3.1.3.1)，是一类水解酶，通过水解磷酸单酯将底物分子上的磷酸基团除去，并生成磷酸根离子和自由的羟基，其去磷酸化作用的底物包括核苷酸、蛋白质和生物碱等，并在碱性条件下最为有效。该酶是一组同功酶的统称。常见的小牛肠碱性磷酸酶(Calf Intestinal Alkaline
Phosphatase, CIAP/CIP)被广泛用于二抗等的标记最终用于蛋白和核酸等的检测，也常用于DNA或RNA 5'和3'末端的去磷酸化(去单磷酸化)，特别是质粒的5'末端去磷酸化以避免质粒自连等。
经限制性内切酶酶切的质粒5′端带有磷酸基团，在进行基因克隆时为避免质粒自连，可以使用BeyoAP Alkaline
Phosphatase去除5′末端磷酸基团。脱去5′末端磷酸基团的质粒不能发生自连。
特点：快速去磷酸化，只需37℃孵育10分钟即可；快速失活，75℃孵育5分钟即可完全失活；使用方便，在各种内切酶和PCR缓冲液中保持100%活性，可以和质粒DNA的消化同时进行；操作步骤简单，对于5′或3′突出末端、平端等各种DNA的脱磷酸化采用完全相同的操作步骤；可直接用于连接反应，经BeyoAP Alkaline Phosphatase脱磷，并75℃孵育5分钟失活后可直接用于后续的连接反应。
用途：通过去除载体或DNA片段5′末端的磷酸基团，防止载体或DNA片段自连；质粒DNA的同时内切酶消化和脱磷；通过5′末端脱磷，为5′末端磷酸化放射性标记准备模板；去除DNA、RNA 5′或3′末端的磷酸基团；用于蛋白质丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸残基的去磷酸化。
来源：大肠杆菌表达，表达基因为一种细菌碱性磷酸酯酶基因。
酶活性定义：37℃10分钟内，催化1μg 线性化的pUC19 DNA5′末端脱磷所需的酶量定义为一个活力单位。
纯度：不含DNA外切酶和内切酶，不含RNA酶。
酶储存溶液：20mM HEPES-NaOH(pH7.4)，1mM MgCl2，0.1mM ZnCl2，0.1% Triton X-100，
50%(v/v)glycerol。
Reaction Buffer(10X)：100mM Tris-HCl(pH8.0 at 37℃)，50mM MgCl2，1M KCl，0.2% Triton X-100，10mM 2-mercaptoethanol，1mg/ml BSA。
失活或抑制：75℃加热5分钟可以使BeyoAP Alkaline Phosphatase失活。金属离子螯合剂对BeyoAP Alkaline
Phosphatase有抑制作用。
包装清单：
XY-7027-1
BeyoAP Alkaline Phosphatase(1U/μl)
200U
XY-7027-2
Reaction Buffer(10X)
0.5ml
保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. 质粒DNA同时进行内切酶消化和5′末端脱磷：
a. 参考如下表格设置去磷酸化反应：
内切酶的Reaction Buffer(10X)
2μl
BeyoAP Alkaline Phosphatase(1U/μl)
1μl
b. 按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 37℃孵育60分钟。注意：如果质粒DNA消化和脱磷后用于后续的连接反应，推荐先参考上表进行内切酶消化，但不加入BeyoAP Alkaline Phosphatase。内切酶消化6-16小时后，再加入BeyoAP Alkaline Phosphatase 37℃孵育10分钟。内切酶消化时间比较长，可以大大减少自连克隆出现的几率。
d. 75℃加热5分钟或根据内切酶失活的其他条件进行酶的失活。
e. 后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化已消化并且脱磷酸化的DNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒(D0033)可以向信裕生物订购；如果切出的片段大于50bp，通常需要进行DNA凝胶电泳和切胶回收。DNA凝胶回收试剂盒(D0056)可以向信裕生物订购。
2. DNA、RNA的5′或3′末端脱磷
a. 参考如下表格设置去磷酸化反应：
待脱磷的DNA或RNA
1--5μg(up to 10pmol termini)
BeyoAP Alkaline Phosphatase(1U/μl)
1μl
b. 按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 37℃孵育10分钟。
d. 75℃加热5分钟失活BeyoAP Alkaline Phosphatase。
e. 后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化已消化并且脱磷酸化的DNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒(D0033)可以向信裕生物订购；如果切出的片段大于50bp，通常需要进行DNA凝胶电泳和切胶回收。
说明：上述脱磷反应可以用于5′或3′突出的DNA，也可以用于平末端DNA，反应条件相同，即均为37℃孵育10分钟。
3. 蛋白去磷酸化
a. 参考如下表格设置去磷酸化反应：
b. 按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 37℃孵育60分钟。
d. 加入EDTA至终浓度为50mM或加入钒酸钠至终浓度为10mM以终止去磷酸化反应。
注意：酶的用量和37℃的孵育时间需根据特定蛋白自行进行优化。
4. 其他用途请参考上述用途或碱性磷酸酶的相关文献资料进行。
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