pET-N-His-TEV

pET-N-His-TEV

pET-N-His-TEV是一种用于表达N端含有His标签(His tag)的原核表达质粒。本质粒N端His标签后含有TEV酶切位点，可通过TEV Protease (P2307/P2308)切除N端的His标签。本质粒为卡那霉素抗性。
本质粒含有T7启动子/lac操纵子，可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点的前面，带有一个His标签的编码序列，含有6个组氨酸(6X His)。因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达N端含有His标签的目的蛋白。
本载体在N端His标签与多克隆位点之间含有TEV蛋白酶(TEV Protease)识别的七肽序列ENLYFQG，对应的核酸序列为GAGAACCTGTACTTCCAAGGG，因此可在目的蛋白纯化后用TEV蛋白酶切除N端His标签。TEV蛋白酶酶切发生在七肽序列的Q和G之间，因此在酶切去除His标签的时候目的蛋白的N端会留下一个额外的氨基酸残基G。
通常可以采用如BeyoGold™ His-tag Purification Resin (P2210/P2218/P2220)或His标签蛋白纯化试剂盒(P2226)等纯化本质粒表达的目的蛋白，也可以使用His-tag抗体(AH367)检测和少量地分离纯化目的蛋白。
pET-N-His-TEV质粒的主要信息如下：

pET-N-His-TEV质粒(5304bp)的图谱如下：

pET-N-His-TEV的多克隆位点的详细图谱如下：

pET-N-His-TEV中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pET-N-His-TEV)包括：

pET-N-His-TEV中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pET-N-His-TEV once)包括：

pET-N-His-TEV质粒中推荐使用的测序引物序列如下：
T7 primer (4988-5004): 5′-TAATACGACTCACTATA-3′
pET-R primer (5218-5237): 5′-TGCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′
pET-N-His-TEV的全序列信息：D2905 pET-N-His-TEV.txt。