A-431 epithelioid cells人皮肤鳞癌细胞系

"A-431 epithelioid cells人皮肤鳞癌细胞系
细胞背景资料：该细胞源自一位患有皮肤鳞状细胞癌的８５岁女性，是GiardDJ等人建立的一系列细胞株中的一株。该细胞在免疫抑制小鼠体内可成瘤，在琼脂上培养可形成克隆；是一个超三倍体人细胞株。
细胞形态：上皮细胞样
细胞复苏相关注意事项：１.取细胞的过程中注意带好防冻手套，护目镜。此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。２.冻存液的问题：冻存液的配置已是常识，在这里不作详述，但二甲基亚砜(DMSO )对细胞不是完全无毒副作用，在常温下，二甲基亚砜对细胞的毒副作较大，因此，必须在１-２min内使冻存液完全融化。如果复苏温度太慢，会造成细胞的损伤，二甲基亚砜(DMSO)选择进口产品。３.离心前须加入少量培养液。细胞解冻后二甲基亚砜浓度较高，注意加入少量培养液可稀释其浓度，以减少对细胞的损伤。４.离心问题：目前主要有两种见解。一种是解冻后的细胞悬液直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养，第二天换液。因为离心的目的是两个，去除DMSO，去除死细胞，这个是标准流程，但对一般人来说，把握不好离心转速和时间，转的不够活细胞沉底的少，细胞就全被扔掉了，转过了活细胞会受压过大，死亡。此外在操作过程中容易污染，所以不推荐。另一种说法为细胞悬液中含有二甲基亚砜(DMSO)，DMSO对细胞有一定的毒副作用，所以须将离心后的液体前倒净，且一定倒干净。我在试验中按照常规的离心分装的方法进行复苏，结果无异常。５.细胞贴壁少的问题：教科书中说明冻存细胞解冻时１ml细胞液要加１０ml-１５ml培养液，而在我的试验中的经验总结为培养基越少细胞越容易贴附。６.复苏细胞分装的问题：试验中我的经验总结为复苏１管细胞一般可分装到１-２只培养瓶中，分装过多，细胞浓度过低，不利于细胞的贴壁。７.加培养基的量放入问题：这个量的多少的把握主要涉及到的问题DMSO的浓度，从如果你加培养基的太少，那么DMSO的浓度就会比较大，就会影响细胞生长，从以前的资料来看，DMSO的浓度在小于０.５%的时候对一般细胞没有什么影响，还有一个说法是１%。所以如果你的冻存液的浓度是１０%DMSO的话那么加１０ml以上的培养基就恰好稀释到了无害浓度。
HDSMC细胞系相关产品：LTEPsm细胞、MHH-CALL-2细胞、Kit 225-K6细胞
PANC 327细胞系相关产品：HepG2/C3A细胞、PC-3M IE8细胞、2E8细胞
U373细胞系相关产品：ASPC1细胞、BIC1细胞、Y-79细胞
细胞生长：贴壁
A-431 epithelioid cells人皮肤鳞癌细胞系
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
细胞的冻存：为避免污染造成的损失，最小化连续细胞系的遗传改变和避免有限细胞系的老化和转化，需要冻存哺乳细胞。冻存细胞前，细胞应该特性化并检查是否污染。有几种普通培养基用来冻存细胞。对于包含有血清的培养基，成分可能如下：包含１０%甘油的完全培养基；包含１０%二甲基亚砜(DMSO)的完全培养基；５０%细胞条件培养基和５０%含有１０%甘油的新鲜培养基或５０%细胞条件培养基和５０%含有１０%二甲基亚砜的新鲜培养基。对于无血清培养基，一些普通的培养基成分可能是：５０%细胞条件无血清培养基和５０%包含有７.５%二甲基亚砜的新鲜的无血清培养基或包含有７.５%二甲基亚砜和１０%细胞培养级BSA的新鲜无血清培养基。悬浮细胞冻存：计数将要冻存的活细胞。细胞应该处于对数生长期。以大约２００～４００g离心５分钟沉淀细胞，使用移液管移去上清到最小体积，不要搅乱细胞。以１×１０(７)到５×１０(７)细胞/ml密度，在包含有血清的冷冻培养基中再次悬浮细胞，或者以０.５×１０(７)到１×１０(７)在无血清培养基中，再次悬浮细胞。分装进冻存管，将冻存管置于湿冰上或放入４℃冰箱中，５分钟内开始冷冻步骤。细胞以１℃/分钟进行冷冻，可以通过可编程序的冷冻器进行或者把隔离盒中的冻存管放到-７０℃到-９０℃的冰箱中，然后转移到液氮中贮存。贴壁细胞冻存：使用分离试剂从基层分离细胞，分离时尽可能温和，使对细胞的损伤减少到最小。在完全生长培养基中，再次悬浮分离细胞，确定有活力细胞数。以大约２００g离心５分钟沉淀细胞。使用移液管移去上清到最小体积，不要搅乱细胞。以５×１０(６)到１×１０(６)细胞/ml密度，在冻存液中悬浮细胞。分装进冻存管，将冻存管置于湿的冰上或放入４℃冰箱中，５分钟内开始冷冻步骤。细胞以１℃/分钟进行冷冻，可以通过可编程序的冷冻器进行或者把隔离盒中的冻存管放到-７０℃到-９０℃的冰箱中，然后转移到液氮中贮存。
细胞传代方法：１：２传代
L132细胞系相关产品：SW 579细胞、UCLA SO M14细胞、SK-LMS-1细胞
PC-3M细胞系相关产品：Murine Lung Epithelial-12细胞、NCIH128细胞、8226/S细胞
SO-RB50细胞系相关产品：U118-MG细胞、NP69SV40T细胞、H-660细胞
SUM 159细胞系相关产品：C8-D1A细胞、IALM细胞、NCI-H2066细胞
BXPC3细胞系相关产品：ARPE-19细胞、Roswell Park Memorial Institute 6666细胞、H-7721细胞
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
A-431 epithelioid cells人皮肤鳞癌细胞系
细胞生长特性：贴壁生长
细胞形态特性：上皮样
培养细胞真的不难，最关键几点：１)所有的东西使用，如果你用的血清、培养皿、培养基、胰酶什么的都是进口的，真的很难相信你会把细胞养坏；２)动作要快，胰酶消化，换液什么，细胞暴露在空气中的时间越少越好。另外，要掌握好胰酶消化时间，所谓的细胞状态差，很多时候是传代的原因；３)有时间的话，需要细胞计数，传相应数目的细胞到培养皿中，可以大致清楚细胞的生长曲线，不会临时要处理，手足无措；４)要做什么心里要非常清楚，合理安排时间，传代细胞的实验穿插进行，可以节省很多时间，也不会耽误别人的实验；５)个人的实验器具自己收一套，不要和别人混用，最近换了什么新的东西稍微记一下，试剂一旦怀疑污染，马上丢；６)传代细胞不能进去太多人，避免相互干扰。每天对待细胞比孝敬爹妈还用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丢了，培养细胞时有哪些经验教训可以分享呢?１)严格无菌操作，多喷喷酒精，要是对灭菌的东西不放心，自己包自己送自己烘干；２)不要和别人共用试剂耗材，自己准备一套；３)有可能的话在拿到新细胞的时候做好支原体衣原体检测；４)水浴锅很脏，生化培养箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏，勤换(灭菌水加进去)；５)晚上离开的时候给传代细胞照紫外，超净台是用完就开；６)是同一时间就你一个人在用传代细胞在养细胞。
NCI-H1404细胞系相关产品：THP-1细胞、159PT细胞、XWLC-05细胞
H-441细胞系相关产品：769-P细胞、OVCAR 5细胞、SUM-190PT细胞
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A-431 epithelioid cells人皮肤鳞癌细胞系
Human fetal lung fibroblast 1细胞系相关产品：OCI AML3细胞、LC-1 sq细胞、WM239细胞
MF2059细胞系相关产品：WM266mel细胞、HBL 100细胞、SU.86细胞
A1847细胞系相关产品：NCI-H345细胞、NCI-H647细胞、P-2003细胞
CT-26细胞系相关产品：Immortal Pig Intestinal-2I细胞、Hs-606-T细胞、A2780/Taxol细胞
MM6细胞系相关产品：Kit225细胞、Rabbit Kidney 13细胞、C3A细胞
Immortal Pig Intestinal-2I细胞系相关产品：CHO Lec1细胞、LM TK negative细胞、Centre Antoine Lacassagne-27细胞
Immortal Pig Intestinal-2I细胞系相关产品：CHO Lec1细胞、LM TK negative细胞、Centre Antoine Lacassagne-27细胞
KATOIII细胞系相关产品：NCI-841细胞、Z310细胞、NIH:OVCAR-4细胞
GM04678细胞系相关产品：P388细胞、L cells (TK-)细胞、GCT细胞
L(TK-)细胞系相关产品：MC57G细胞、SUNE-1细胞、RKO-AS-45-1细胞
Rat Lung-65细胞系相关产品：M-07e细胞、OCI Ly3细胞、Mv.1.Lu细胞
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Hs-27细胞系相关产品：SKNBE2细胞、NTERA2-D1细胞、SNU5细胞
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HEC251细胞系相关产品：CL1-0细胞、IHH4细胞、MDA453细胞
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GES-1细胞系相关产品：HCET细胞、PC-14细胞、GI-1细胞
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OCI/AML-2细胞系相关产品：HCC94细胞、SKNFI细胞、HC11细胞
EA. hy 926细胞系相关产品：SUM190PT细胞、THLE-2细胞、AU 565细胞
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SKML-28细胞系相关产品：CT26.CL25细胞、TE32细胞、PG13细胞
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NCI-H2106细胞系相关产品：Institute for Medical Research-32细胞、SK-OV-433细胞、VMM-5A细胞
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Intestinal Porcine Epithelial Cell line-1细胞系相关产品：OVCAR-5细胞、A-101D细胞、FCCH1018细胞
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HIEC-6细胞系相关产品：GM04679细胞、SW1573细胞、RPMI2650细胞
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Murine Carcinoma-38细胞系相关产品：SNU-739细胞、95-D细胞、87MG细胞
A-431 epithelioid cells人皮肤鳞癌细胞系
HNE2细胞系相关产品：SKN-AS细胞、Panc-05.04细胞、HPAEC细胞
Centre Antoine Lacassagne-12T细胞系相关产品：MDA MB 134VI细胞、293细胞、N-Tera-2细胞
PLA801-95D细胞系相关产品：SJSA细胞、Wien 133细胞、SCC 9细胞
Colo699细胞系相关产品：H-2330细胞、HBZY 1细胞、B16F0细胞
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