细胞膜红色荧光探针
中文名称:细胞膜红色荧光探针
英文名称:DiI
产品规格:10mg
DiI是一种亲脂性的荧光染料,可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构,进入细胞膜后,DiI在整个细胞膜上扩散,浓度时可以使整个细胞膜染色。DiI在进入细胞膜之前荧光非常弱,当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强,DiI被激发后可以发出橙红色的荧光,具有很高的淬灭常数,中等强度的光量子和很短的激发态寿命。可以用标准的TRITC滤光片检测。 DiI通常不会明显影响细胞的生存力,因此被广泛用于正向或逆向的,活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂(long-term tracer)。除了最简单的细胞膜荧光标记外,还可以用于检测细胞的融合和粘附,检测发育或移植过程中细胞迁移,通过FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching)检测脂在细胞膜上的扩散,检测细胞毒性和标记脂蛋白等。 CAS:41085-99-8 分子式:C59H97ClN2O4 分子量:933.87 外观:红色至暗红色,紫色至深紫色粉末 Ex/Em:550/567 nm 推荐滤光器:XF32-Omega, 31002-Chroma 纯度:≥98%(TLC) 溶解性:溶于DMF,DMSO,甲醇 储存条件:4℃避光,有效期一年 结构式: 使用方法 1. 染色液制备 (1)配置DMSO或EtOH 储存液:储存液用 DMSO或EtOH配置浓度1~5 mM。 【注】未使用的储存液分装储存在-20℃,避免反复冻融。 (2)工作液制备:用合适的缓冲液(如:无血清培养基,HBSS或PBS)稀释储存液,配制浓度为1~5 μM的工作液。 【注】工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。 2. 悬浮细胞染色 (1)加入适当体积的染色工作液重悬细胞,使其密度为1×106/mL。 (2)37 ℃孵育细胞 2~20min,不同的细胞培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记结果。 (3)孵育结束,按1000~1500 rpm离心5min。 (4)倾倒上清液,再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。 (5)重复(3),(4)步骤两次以上。 3. 贴壁细胞的染色 (1)将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。 (2)从培养基中移走盖玻片,吸走过量培养液,将盖玻片放在潮湿的环境中。 (3)在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液,轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。 (4)37 ℃孵育细胞 2~20min,不同的细胞培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记结果。 (5)吸干染料工作液,用培养液洗盖玻片2~3次,每次用预温的培养基覆盖所有细胞,孵育5~10min,然后吸干培养基。 4. 显微镜检测 (1)DiD,DiO,DiI,DiR和DiS滤光器的选择参见表1。 (2)多色染料的同时检测,滤光器按照以下设定: a) DiI和DiO=Omega XF52,Chroma 51004; b) DiI和DiD=Omega XF92,Chroma 51007; c) DiI,DiO和DiD=Omega XF93,Chroma 61005 5. 流式细胞仪检测 经DiO,DiI,DiD和DiR染色的细胞可分别用流式细胞仪的FL1,FL2,FL3或FL4通道检测。
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