HL-60细胞：人原髓细胞白血病细胞系

"HL-60细胞：人原髓细胞白血病细胞系

细胞背景资料：该细胞由CollinsSJ从一位患有急性早幼粒细胞性白血病的３６岁白人女性的外周血中分离建立；可自发分化，或在盐、次黄嘌呤、佛波醇肉豆蔻酸(PMA,TPA)、DMSO(１%to１.５%)、D和视黄酸的刺激下发生分化；PMA刺激后可分泌TNF-α。该细胞具有吞噬活性和趋化反应，癌基因myc阳性，表达补体受体和FcR。

细胞形态：淋巴母细胞样

细胞生长：悬浮

细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源

细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)

细胞传代方法：维持细胞浓度在１×１０５-１×１０６/ml,每２-３天换液１次。

细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系

细胞生长特性：悬浮生长

购买细胞注意事项：１)收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系；２)仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等；３)用７５%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养过夜，隔天再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次；４)建议客户收到细胞后前３天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和公司技术部沟通交流。【细胞传代操作步骤】一、贴壁细胞传代：１)提前将培养基、PBS放入３７℃水浴锅内预热，用７５%酒精擦拭后再放入超净台内；２)吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞；３)加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，３７℃孵育，每隔２~３min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用；４)用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡；５)将细胞悬液分别接种到另外的２~３个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置３７℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。二、悬浮细胞传代：１)将细胞悬液转移到无菌离心管内，１０００rpm离心５min；２)弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液；３)将细胞悬液分别接种到另外的２~３个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置３７℃温箱培养。

绝大部分细胞消化的时候是只要用胰酶润洗一遍即可。吸去胰酶后，残留的那些无法计算体积的附着在细胞表面的微量胰酶在37℃一般不到2min足够消化细胞。对于这些细胞原则上不要用胰酶孵育细胞，连续这样传代，对细胞伤害很大。简单的程序是PBS润洗吸去，胰酶润洗吸去，然后37℃消化。比较难消化的细胞（润洗方法5min还不能消化），这样的细胞一般需要用少量胰酶孵育。不是细胞全部成间隔分布很离散的单个圆形才算消化好了，一般你肉眼观察贴壁细胞层，只要能移动了，多半呈沙壮移动，其实已经可以了，很多人喜欢把细胞消化或者吹打成完全分离细胞，这是没有必要的。一般能移动了，说明细胞与培养基质材料的附着已经消失了，细胞之间的附着也已经消失了，细胞已经独立分布了（虽然没有呈现很广的离散分布）。这个时候应该停止消化，不要等到看到镜下所有细胞都分离得非常好，间隙很大，才停止。细胞就是完全成单个细胞悬液，之后在贴壁的过程中仍然会聚集，这个是贴壁培养的细胞，尤其是肿瘤细胞的一个特性。如果和标准形态不一致，那可能是自己没消化好导致的，但如果消化方法正确，仍然成片分布，甚至完全吹打成单细胞悬液，贴壁后仍然成片分布，这是细胞的特性，是因为贴壁过程中重新聚集了。这个时候你拼了命要去让它均匀分布，你的细胞之后会对你越来越不好。

细胞冻存基本方法：１．细胞：选对数生长期细胞，收集细胞２４小时前换液一次。２．计数：按常规方法把细胞制成细胞悬液，计数，令细胞密度达５×１０(６)/ml，离心去上清，吸入离心管中。３．冻存液：先用培养液９分＋DMSO １分（或甘油）配成１０％的DMSO冻存液，按上法一滴滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。４．分装：分装入无菌安剖中，每安剖加１.５毫升细胞悬液。５．封口：用塑料安剖时拧紧瓶口即可；如用火焰封闭安剖口后，仔细检查，定要封严，必要时可浸入蓝色液中观察，为安全起见，把安剖缝入纱布小袋中，以防液氮浸入后，融解时因受热发生爆炸伤人；纱袋一端系以线绳，末端扎有小牌，注明：细胞名称，冻存日期，以便日后查找。细胞株(系)的使用，为医学研究和测试工作带来了极大的方便。但细胞的传代是有限制的，长期连续传代的细胞，不仅消耗大量的人力和物力，而且细胞的生长与形态等会有一定退变或转化，因而细胞失去原有的遗传特性，有时还会由于细胞污染而造成传代中断，种子丢失。因此，在实际工作中常需冻存一定数量的细胞，以备替换使用。细胞冷冻与复苏是细胞培养 室的常规工作和通用技术。

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