MPBio生产的LSM,成功地用泛影酸钠代替了甲泛影酸钠,是一种灭菌过滤溶液,每100毫升包含6.2克聚蔗糖和9.4克泛影酸钠。密度是1.0770-1.0800克/毫升20℃。
1. 轻轻颠倒瓶子使LSM充分混合 2. 无菌转移3 mlLSM到15 ml离心管中。 3. 混合2 ml除纤维蛋白血液或肝素处理血液和2 ml 生理盐水 4. 仔细的将稀释血液加入3 mlLSM(室温)于15ml离心管中,在血液和LSM中形成一个明显的分层。不要将稀释血液混合入LSM中。 5. 室温下400g离心15-30分钟,离心可以沉淀红细胞和多核白细胞同时可以在LSM上形成一层单核淋巴细胞,如上图所示。 6. 吸出淋巴细胞上方2-3mm的血浆。 7. 吸取淋巴细胞层以及它下面一半的LSM和转移到另外的一个离心管。加入等体积的平衡盐缓冲液至淋巴细胞离心管中,室温离心10分钟,离心速度设定在既不损伤细胞又能沉淀细胞即刻,例如160 – 260 x g(去除LSM和降低血小板的百分比)。 8. 用平衡盐缓冲液清洗细胞,用适当的培养基重悬细胞。
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