DMS 79 Cells(赠送Str鉴定报告)|人小细胞肺癌细胞

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细胞背景资料：详见相关文献介绍

细胞形态：上皮细胞样

传代培养及其操作步骤：原代细胞培养成功以后，需要进行分离培养，否则细胞会因生存空间不足或密度过大，营养障碍，影响细胞生长。细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶中培养的过程称之为传代培养。传代细胞允许培养的细胞扩增(形成细胞株)，可以进行细胞克隆，易于保存，但可能丧失一些殊的细胞和分化征。传代细胞形成细胞株的Zui大利处在于提供了大量持久的实验材料，便于实验。【操作步骤】１)吸掉或倒掉培养瓶内旧培养液；２)向瓶内加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆盖培养瓶底为宜；３)置３７℃孵箱或室温(２５℃温度)下进行消化，２~５min后把培养瓶放在倒置显微镜下进行观察，当发现胞质回缩、细胞间隙增大后，应立即中止消化；４)吸出消化液，向瓶内加入Hanks液少量，轻轻转动培养瓶，把残留消化液冲掉，然后再加培养液。如果仅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后，可直接加入少量含血清的培养液，终止消化；５)使用弯头吸管，吸取瓶内培养液，按顺序反复轻轻吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。吹打时动作要轻柔，以防用力过猛损伤细胞；６)用计数板计数后，分别接种于新的培养瓶中，置CO２培养箱中进行培养；７)细胞培养换液时间应根据细胞生长的状态和实验要求来确定。一般２～３d后应换一次生长液。待细胞铺满器皿底面，即可使用；也可继续传代扩大培养或换成维持液。【注意事项】１)掌握HAO细胞消化的时间，消化时间过短时，细胞不宜从瓶壁脱落，过长的消化会导致细胞脱落、损伤；２)掌握HAO消化浓度，当消化液浓度过GAO时，消化时间应缩短，过低时细胞消化时间相对延长。

细胞生长：贴壁

LAD 2细胞类似产品：：GC-1细胞、SN4741细胞、Hs 746T细胞

STC-1细胞类似产品：：Tu-686细胞、P3-NS1/1Ag 4.1细胞、NIH/3T3细胞

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CCD 966 SK细胞类似产品：：A2780 CP70细胞、149PT细胞、BE2-C细胞

DMS 79 Cells(赠送Str鉴定报告)|人小细胞肺癌细胞

细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源

[细胞产品包装]鲜活细胞：T２５培养瓶(一瓶)或冻存细胞：１ml冻存管(两支)

预防细胞污染的注意事项：实验进行前，超净台用紫外灯照射30-60min，然后用75%酒精擦拭超净台台面，并开启超净台风扇运转10min左右再开始实验操作。实验用品用75%酒精擦拭后才能放入超净台内；实验用品用完应移出超净台，以利于气流的流通。实验完成后用75%酒精擦拭超净台台面。每次操作只处理一种细胞；即使不同细胞使用相同的培养基也不要共享同一瓶培养基，避免细胞间的交叉污染。操作时小心取用无菌的物品，避免污染。勿碰触吸管尖头，不小心碰触后应立即更换；不要在打开的容器瓶口正上方操作，容器打开后，倾斜45°操作，操作完成后及时盖上瓶盖。CO2培养箱的清洁是较易被忽视的地方，应1-2个月对培养箱定期进行清洁消毒。先用75%酒精擦拭培养箱内壁、隔板、水盘2-3次，用双蒸水清洗，再用酒精棉球擦拭一遍，后紫外灯照射4h以上。水盘内加入无菌水（应每周更换），待培养箱内温度、湿度、CO2浓度稳定后再放入细胞。定期清洗或更换超净台过滤膜、预滤网。

细胞传代方法：１：２-１：４传代；每周换液２-３次。

KAT-5细胞类似产品：：NCIH2030细胞、NCIH1993细胞、CMT93细胞

UCLA SO M21细胞类似产品：：MAVER-1细胞、Mono Mac 6细胞、SF-295细胞

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CL1-5细胞类似产品：：HuH-1细胞、HEp-2细胞、SW 626细胞

U-118-MG细胞类似产品：：KP4细胞、Hs611T细胞、NB-9细胞

细胞来源说明：来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库

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细胞生长特性：悬浮生长

RA.1细胞类似产品：：TT细胞、H-1092细胞、COLO 680N细胞

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为什么培养的细胞要及时传代？体外培养的细胞大多具有生长接触抑制的性，也就是说当一个细胞被其他细胞包围的时候，它就会停止生长，及时传代后，细胞的生长得以继续。培养细胞生长减慢的原因在哪些?其解决办法有哪些？可能的原因有：更换了不同的培养液或血清；培养液中一些细胞生长必需成分如谷眈肢或生长因子等耗尽或缺乏或己被破坏；培养物中有少量细菌或真菌污染；试剂保存不当；比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清等，找出其它可能的原因。解决办法：增加起始培养细胞浓度；让细胞逐渐适应新培养液；换入新鲜配制培养液；补加谷酷肢或生长因子等；用无抗生素培养液培养，如发现污染，去弃培养物，或用抗生素除菌；血清需保存在５℃到２０℃; 培养液需在２-８℃避光保存;含血清完全培养液在２-８℃保存，并在２周内用完;分离培养物，检测支原体。冷冻管应如何解冻？取出冷冻管后，须立即放入３７℃水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在１-２分钟内大部分融化，别注意，需残留一小块冰块，就可拿到超净工作台操作细胞，用７５%酒精消毒冻存管，用新鲜培养基将细胞转移至培养瓶。另外冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管爆裂。

正确的细胞复苏需知事项：细胞冻存HAO了，接下来要注意什么问题呢？没错，就是记得到时间了，拿出来复苏。那么，细胞复苏的过程中又有哪些该注意的事项呢？细胞活力和形态检查的作用何在？活力检查——千万不要使用不健康的细胞，可能有污染(真菌、支原体等)，如果发现有污染毫不犹豫的丢弃!形态检查——检查细胞的固有形态和生长行为。冻存细胞：补充新的培养液——在您开始冻存细胞的前一天补充新的培养液。在细胞长至７０%单层时收获细胞，计数活细胞数，用冻存液调整细胞密度~５ x１０６ Cell s/ml (根据不同的细胞类型调整)；冻存液——用冻存液洗细胞并用冻存液重悬细胞，有不同类型的冻存液，根据细胞类型选择Zui合适的冻存液(常用的冻存液成分有)：５-１０% DMSO——注意确保DMSO不含有其他的毒性物质；５-１５%甘油；如果细胞在无血清培养基内生长，应在５０%条件培养基内(细胞在无血清培养基内生长２４小时)内冻存和复苏。在冻存管上标记HAO细胞类型，日期，冻存人等信息，并保证每冻存管不超过１.５ml。放入液氮罐之前记录冻存管的数量和位置。以Zui快的速度转移冻存管知液氮罐内，因此，此步骤ZuiHAO使用干冰，或者把冻存管浸入装有液氮的小盒内。此外还要注意，在冻存管上没有足够的空间记录细胞的详细信息，做HAO记录是非常非常重要的！还有一个Zui重要的，一定要在异地的液氮罐内保存同样的一份细胞，以免其中的一个液氮罐出现问题！细胞正确的复苏方式和正确的冻存方式同样重要，熟记以下要点：当从液氮罐内取出细胞时，有可能会出现冻存管破裂的情况，使用保护面罩和防护服十分必要；其实，细胞复苏只是一个简单的实验，不过这其中却不可避免有一些需要注意的细节，不然，也不一定会尽如人意。例如说，人身健康方面：一定要记得做HAO防冻工作，戴上护目镜；尽量降低DMSO对细胞的损伤等等。

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