透明质酸

透明质酸是一种酸性粘多糖，以其独特的分子结构和理化性质在机体内显示出多种重要的生理功能，如润滑关节，调节血管壁的通透性，调节蛋白质，水电解质扩散及运转，促进创伤愈合等。尤为重要的是，透明质酸具有特殊的保水作用，是目前发现的自然界中保湿性最好的物质，被称为理想的天然保湿因子。

透明质酸的功效与作用：

1，对水有优异的亲和性，在组织内部使水重新组织起来，更好地承担负荷或润滑。

2，发生折叠形成三维网络，产生生理效应。包括产生流体阻力，维持体内水平衡和内环境稳定，影响生物大分子的溶解度、空间构型、化学平衡和系统渗透压，阻止病原播放，引导胶原纤维分泌性物质的沉积。

3，与不能分离的蛋白质连接形成聚合体，维持组织的形状和体积，保证组织的可逆性抗压缩力。

4，对巨噬细胞、粘细胞、淋巴细胞、自然杀伤细胞均有一定作用。

5，透明质酸(简称HA)是细胞间质的重要成分，主要在肝内降解。肝纤维化活动时，HA合成增加，加之肝硬化时功能减低，故血中HA水平异常升高。目前评价HA是一个诊断肝纤维化程度和肝硬化的敏感性和特异性极高的指标。

构成蛋白多糖的氨基多糖有透明质酸、软骨质及硫酸软骨质、硫酸肤质、硫酸角质、肝素及硫酸乙酰肝素。
透明质酸是一种生物高分子，是完全透明、不粘、溶于水而无油腻的酸性粘多糖，分子量在数十万至数百万之间，是构成皮肤真皮层的物质。用它作保湿剂能增强保湿、润滑作用，并具有扩张毛细血管和促进皮肤营养的作用。
透明质酸是体内多种组织，尤其是皮肤、结缔组织等的细胞间物质中的一种氨基多糖，曾从玻璃体液、脐带、角膜、动脉壁、关节液、滑液、皮肤等提取，主要起着润滑粘合等作用。它是一种杂多糖，由D葡萄糖醛酸借β1.3糖苷键与N乙酰D氨基葡萄糖缩合成双糖单位，然后再借β1.4糖苷键将许多个双糖单位连接成长的直链，其分子量约在10万至1000万之间，在体内与蛋白质结合，故是一种蛋白多糖，但制备所得的透明质酸含蛋白质甚少，不超过1～2%。在一些组织，如软骨中，透明质酸与硫酸软骨质及硫酸角质形成的蛋白多糖聚集体乃是组织结构上的重要组成。低分子量的透明质酸用作化妆品中的天然保湿剂，以及用作外科手术(如膝盖手术等)的润滑剂，高分子量的则可用作外科手术的润滑剂以及眼科手术的玻璃质体的替代剂。

透明质酸为白色无定形固体，无臭无味，有吸湿性。溶于水，不溶于有机溶剂。水溶液的比旋度为-70°-80°。最突出的是有较高的黏度特性，其溶液的黏度，遇下列情况，可发生不可逆的下降：pH值低于或高于7；透明质酸酶存在；许多还原性物质如半胱氨酸、焦性没食子酸、抗坏血酸或重金属离子存在；(4)紫外线、电子束照射等。
由(1→3)-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-葡萄糖-(1→4)-O-β-D-葡萄糖醛酸的双糖重复单元组成的一种高分子聚合物，水解时生成一种己糖胺(如葡萄糖胺)和一种糖醛酸(如葡萄糖醛酸)。原来只作为生化试剂，现已成为有较高临床价值的生化药物。它在自然界中，广泛存在于动物各组织中：结缔组织、脐带、皮肤、人血清、鸡冠、关节滑液、脑、软骨、眼玻璃体、人尿、鸡胚、兔卵细胞、动脉和静脉壁中。透明质酸常与蛋白质相结合，并与其他黏多糖共存。在玻璃体和滑液中，以溶解形式存在，在鸡冠和脐带中以凝胶形式存在。眼科“黏性手术”必备药物。应用于白内障手术，其钠盐易存留于前房，使前房维持一定深度，保持清晰的手术视野，减少手术后炎症和并发症的发生，从而提高手术矫正视力的效果。亦用于复杂视网膜脱离手术。
它还被作为理想的天然保湿因子，广泛用于化妆品之中，能改善皮肤营养，使皮肤光华细嫩。用作高档化妆品添加剂，也用于医药用途：用于膏、霜、奶液、面膜及精华素中作保湿剂。方法一、以公鸡冠为原料
取鸡冠丙酮脱水，粉碎，加蒸馏水浸泡24h，充分溶胀后，过滤，滤渣用蒸馏水反复提取3次，合并滤液，加入100g/L(10%)氯化钠，溶解后，加入等体积的氯仿，搅拌3h，分出水相，再加2倍体积的95%乙醇沉淀透明质酸，脱水，干燥，得粗品。
鸡冠[丙酮]→脱水碎鸡冠[蒸馏水]→[24h]滤液[NaCl, 氯仿]→水相[95%乙醇]→透明质酸沉淀→粗品
将粗品溶于0.1mol/L氯化钠溶液中，用稀盐酸调pH 4.5-5，加入等体积的氯仿搅拌，处理2次，水相用NaOH液调pH 7.5，加链霉蛋白酶37℃保温24h，酶解液用氯仿处理2-3次，水相加等体积10g/L(1%)氯化十六烷基吡啶溶液，放置沉淀，沉淀物加0.4mol/L氯化钠溶液搅拌解离，离心，分取上清液，用3倍体积的95%乙醇反复沉淀，脱水，干燥即得精品。
粗品[0.1mol/L NaCl]→溶解液[稀HCl, 氯仿]→[pH4.5]水相[NaOH, 键霉蛋白酶]→[pH7.5, 37℃, 24h]酶解液[氯仿]→水相[氯化十六烷基吡啶]→沉淀[NaCl]→上清液[95%乙醇]→沉淀→精制品
国外文献报道，用蒸馏水可从鸡冠中提取93%的透明质酸，粗品的回收率在90%以上，总收率高达6%。
方法二、人脐带为原料
取丙酮脱水脐带碎块加入蒸馏水浸泡24h，提取，反复提取4次，过滤，合并滤液。
脐带[丙酮]→脱水脐带碎块[蒸馏水]→[24h]提取液→滤液
将上述滤液中加100g/L(10%)的氯化钠搅拌溶解，用稀盐酸调pH 5，再加等体积氯仿搅拌处理，待分层后分出水相，同样操作处理2次，然后用稀氢氧化钠调pH 7.5，加4g/L(0.4%)链霉蛋白酶，置37℃水浴保温24h，酶解液加等体积氯仿反复处理，然后用3倍体积的95%乙醇沉淀出透明质酸。收集浮于乙醇液上部的纤维状沉淀和底部的粉状沉淀，分别脱水，干燥，即得透明质酸组分I和组分Ⅱ。
滤液[NaCl, 稀HCl，氯仿]→[pH5]水层[NaOH, 链霉蛋白酶]→[pH7.5, 37℃, 24h]酶解液[氯仿，乙醇]→透明质酸
将透明质酸组分I溶于生理盐水中，通过6号垂熔漏斗过滤除菌，用无菌丙酮沉淀透明质酸，过滤，干燥，再溶于适量的无菌缓冲液中，配成1%溶液，无菌分装即得注射剂。总收率为丙酮脱水脐带块的2%。
方法三、皮肤为原料的制法
Shimada和Matsumura曾设计了两种不同的方法。第一种制备法，将冻干的兔皮块，磨碎，丙酮脱脂，加0.5mol/L氯化钠溶液制匀浆，用氯化十六烷基吡啶沉淀，连续溶于浓度递增的氯化钠溶液中，然后溶于0.5mol/L氯化钠溶液中，0.5mol/L氯化钠组分进一步用DEAE-Sephadex层析法纯化，得透明质酸，相对分子量1×10⁴-7.2×10⁴。第二种制法，兔皮块直接脱脂(不冻干和机械粉碎)，悬浮于水中，100℃加热提取，提取物用链霉蛋白酶和Dnase处理，经Sephadex G-75和Sepharose 4B进一步纯化制得。相对分子量1.6×10⁵-1.3×10⁶。两种方法收率近似，第一种方法可能由于机械处理使透明质酸降解。
方法四、羊眼球为原料的制法
取冷冻的羊眼球用水解冻，剥出玻璃体，融化离心，分出上层清液，加入丙酮，放置，离心，沉淀溶于1mol/L氯化钠溶液中，搅拌，离心。上层清液加入三氯乙酸，离心，分出上层清液，用氯氧化钠调pH至中性，加3倍量的95%乙醇沉淀，再经乙醇、丙酮脱水，置P2O5真空干燥器干燥得透明质酸钠粗品，收率占玻璃体干重的2.8%。
将粗品溶于氢氧化钠溶液中，加入处理好的漂白土吸附，离心，收集上清液，加入溴代十六烷基吡啶(CPB)溶液，得透明质酸钠-CPB复合物沉淀。取沉淀经洗涤，用0.4mol/L氯化风俗进行解离，抽滤，收集清液，加乙醇沉淀，再经乙醇、丙酮脱水，置P2O5真空干燥器干燥得透明质酸钠精品，收率占粗品干重的62%，总收率为1.8%。