凋亡因子CASPASE系列检测

Caspase全称为含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase)，是一组存在于细胞质中具有类似结构的蛋白酶，与真核细胞凋亡密切相关，并参与细胞的生长、分化与凋亡调节。Caspase是一类蛋白酶家族，根据其蛋白酶序列的同源性可分为3个亚族：Caspase-1亚族包括 Caspase-1、4、5、11；Caspase-2亚族包括Caspase-2、9； Caspase-3亚族包括Caspase-3、6、7、8、10。起细胞凋亡执行作用的是caspase-3、6、7。Caspase又分为起始者（initiators）和执行者（executioners）两类，起始Caspase在外来蛋白信号的作用下被切割激活，激活的起始Caspase对执行者Caspase进行切割并使之激活，被激活的执行者Caspase通过对caspase靶蛋白的水解，导致程序性细胞死亡。
1、凋亡起始者：Caspase 9、8、2、10、11；同性活化——切割自身前体
2、凋亡执行者：Caspase 3、6、7；异性活化——切割结构蛋白、功能蛋白半胱氨酸蛋白酶caspase家族蛋白的激活是凋亡进程中的一个必要的决定性事件。其中caspase-3的激活在凋亡信号传导的许多途径中发挥着关键的作用。Caspase-3正常以酶原（32KDa）的形式存在于胞浆中，在凋亡的早期阶段，它被激活，活化的Caspase-3由两个大亚基（17KDa）和两个小亚基（12KDa）组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。活化的Caspase-3可以剪切特定的氨基酸序列。嘉美实验用具有高度特异性Caspase-3荧光底物用来检测Caspase-3 活性。在Caspase的底物多肽(如Caspase-3的底物为DEVD)上标记pNA (p-nitroanilide, 对硝基苯胺).当活化的Caspase剪切标记的底物多肽后, pNA被释放出来,此时游离的pNA的发射光谱可用分光光度计或酶标仪在400或405nm 检测,进而推知Caspases的活性.