乳酸含量（lactic acid，LA）试剂盒

乳酸含量（lactic acid，LA）试剂盒说明书

分光光度法50管/24样

注    意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

乳酸是生物体代谢过程中重要的中间产物，与糖代谢、脂类代谢、蛋白质代谢及细胞内能量代谢密切相关，乳酸含量是评估糖元代谢的和有氧代谢的重要指标。

测定原理：

乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成丙酮酸，同时使NAD⁺还原生成NADH和H⁺，H⁺传递给PMS生成的PMSH₂还原INT生成红色物质，在530nm处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器：

天平、研钵、离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、恒温水浴锅。

试剂组成和配制：

提取液：液体55mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体5mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体12mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：粉剂×1支，-20℃避光保存。临用前加入1.5mL蒸馏水充分溶解。

试剂四：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加15mL蒸馏水充分溶解。

试剂五：粉剂×1支，4℃避光保存。

标准品：液体1mL×1支，4℃保存。

显色液：临用前根据用量按照提取液（V）：试剂三（V）：试剂四（V）：试剂五（m）=1（mL)：0.3（mL)：3（mL)：15（mg）的比例充分混匀。（注意：现配现用，用多少配多少，在棕色瓶中配制，试剂盒中带有5个棕色空瓶）

样本处理：

1. 组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，12000g离心10min，取上清测定。

2. 细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；于4℃，12000g离心10min，取上清测定。

3. 血清：直接测定。              

测定操作：

注意：标准对照管和标准测定管只需测定一次，每个样品测定管设一个样品对照管

计算公式：

1. 按照蛋白含量计算

LA含量（μmol/mg prot）=△A样÷△A标×C标÷ Cpr

                    =2×△A样÷△A标÷ Cpr

2. 按照样本质量计算

LA含量（μmol/g 鲜重）=△A样÷△A标×C标÷ W

                    =2×△A样÷△A标÷ W

3. 按照细胞数量计算

LA含量（μmol/10⁴ cell）=△A样÷△A标×C标÷ 细胞数量

                    =2×△A样÷△A标÷ 细胞数量

4. 按照液体体积计算

LA含量（μmol/mL）=△A样÷△A标×C标

                    =2×△A样÷△A标

C标：标准品浓度，2mmol/L ；W：样本质量，g/mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL

注意事项

1. 若吸光值超过2，请进行适当的稀释后再进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。

2. 最低检出限为1.8μmol/L。