背景及概述[1-2]
软骨由软骨组织及其周围的软骨膜组成。软骨膜为致密的结缔组织，对软骨有保护和营养作用。软骨组织由软骨细胞、纤维和基质构成。基质呈均质固态，主要由水和软骨粘蛋白组成。甲苯胺蓝(ToluidineBlueO)是一种常用的人工合成染料，属于醌亚胺染料类。这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团，从而成色原显色。甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用，组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。甲苯胺蓝不仅含有两个发色团，还含有两个助色团，能促使染料产生电离成盐类，帮助发色团对组织产生染色力，使切片上的组织细胞着色，可染细胞核使之呈蓝色；肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色。软骨染色液(甲苯胺蓝法)呈强碱性，更利于组织细胞的着色。
操作步骤[1]
- 常规脱钙，包埋、固定。
- 石蜡切片入二甲苯2次。
- 系列乙醇各1min自来水洗。
- 入软骨染色液(甲苯胺蓝法)浸染。根据不同组织，染色时间不完全相同。
- 自来水洗2min，滤纸吸干水分。
- 丙酮分化至软骨细胞呈蓝紫色清楚可见。
- 逐级乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
结果：软骨、成骨细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。
注意：软骨染色液(甲苯胺蓝法)针对较难着色组织的染色，侵染的时间相对延长。
主要参考资料
[1] 中国骨伤科学辞典
[2] 软骨染色液(甲苯胺蓝法)操作说明