背景[1-3]
小鼠降钙素原(PCT)Elisa试剂盒是一种专门用于测定小鼠血清、血浆和其他相关生物液体中降钙素原（PCT）浓度的工具。这种试剂盒采用了双抗体夹心法酶联免疫吸附检测技术（ELISA），通过特定的酶标孔和显色反应，可以准确测量样本中的PCT水平。
使用小鼠降钙素原(PCT)Elisa试剂盒时，需要注意以下几点：
1.试剂盒从冷藏环境中取出后，需要在室温下平衡一段时间（通常为15-30分钟）后方可使用。酶标包被板开封后，未使用的板条应放入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出，但在水浴中加热溶解后不会影响结果。
3.加样时应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免实验误差。一次加样时间应控制在5分钟内，如样本数量多，推荐使用排枪加样。
4.每次测定时应同时做标准曲线和复孔，以确保结果的准确性。如果样本中待测物质含量过高，应先用样品稀释液稀释后再测定。
5.试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。使用后的标准品应丢弃，不可保存。实验中不用的板条和其他试剂应及时密封保存，以免变质。不同批号的试剂不要混用。
此外，操作中还需要自备一些物品，如酶标仪（450nm）、高精度加样器及枪头、37℃恒温箱等。同时，为确保实验的准确性和可靠性，务必严格遵循试剂盒的使用说明和操作步骤。
小鼠降钙素原(PCT)Elisa试剂盒
小鼠降钙素原(PCT)Elisa试剂盒操作步骤
实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。
1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。
3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。
4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。
5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。
6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。
7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。
应用[4][5]
小鼠降钙素原(PCT)Elisa试剂盒可以用于PCT单克隆抗体的制备及其ELISA检测方法的初步建立
利用单克隆抗体制备技术,制备符合临床使用要求的PCT单克隆抗体,并用其建立PCT酶联免疫定量检测方法,为临床判别细菌性感染疾病和抗生素合理应用提供一种有效的方法和应用指导。
方法:用his-hrPCT抗原作为免疫原免疫BaLb/c小鼠,间接ELISA法检测免疫效价。采用免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合制备杂交瘤细胞,利用trx-hrPCT蛋白作为包被抗体,HRP-抗鼠IgG作为酶标抗体,通过间接ELISA法筛选阳性细胞株,并通过有限稀释法筛选、获得稳定的单克隆抗体细胞株,从而制备单克隆抗体。采用小鼠降钙素原(PCT)Elisa试剂盒双抗体夹心法筛选获得配对的PCT单抗,通过对其包被液及包被条件选择、封闭液及封闭条件选择、最佳包被抗体浓度和酶标抗体浓度确定、最佳反应时间、线性范围、批内精密性、回收率、稳定性、灵敏度及特异性、干扰因素、临床标本检测等研究,建立PCT酶联免疫双抗体夹心法的检测方法。
小鼠降钙素原(PCT)Elisa试剂盒结果:当小鼠免疫效价达到1:105后,以脾细胞与骨髓瘤细胞进行3次细胞融合,筛选得到10株阳性细胞株,通过有限稀释法3次克隆化最终获得4株阳性细胞株,分别命名为F1D5,F2H3,F3B7,F3D2。注射腹腔制备腹水,间接ELISA检测效价均达到3.2×105,以辛酸-硫酸铵法纯化抗体。标记抗体,获得一组(F1D5、F3B7)配对单抗,并以此为基础研究确定小鼠降钙素原(PCT)Elisa试剂盒双抗体夹心ELISA检测的相关条件:包被液及包被条件为0.05 mol/L、pH 9.6的CB缓冲液4℃包被12 h;封闭液及封闭条件为0.6%BSA 37℃封闭2 h;最佳包被抗体F1D5浓度为400 ng/mL,酶标抗体F3B7浓度为1:8000;37℃孵育30 min,酶标二抗孵育30 min,显色20 min的反应模式。建立的检测方法线性范围为0.5 ng/mL-10ng/mL(R2=0.9912);批内精密性小于10%;高中低值平均回收率分别为99.00%、98.68%、108.69%;稳定性检测显示:37℃可稳定保存9天;灵敏度为95.6%,特异性为97.8%;PCT阴性及阳性干扰物质对本实验结果无明显干扰;与罗氏检测试剂盒对比检测200份临床血清,显示相关性良好(R2=0.9391)。
参考文献
[1]Procalcitonin in the diagnosis of inflammation in intensive care units[J].Romolo M.Dorizzi;;Enrico Polati;;Piersandro Sette;;Anna Ferrari;;Paolo Rizzotti;;Aldo Luzzani.Clinical Biochemistry,2006(12)
[2]Procalcitonin expression in human peripheral blood mononuclear cells and its modulation by lipopolysaccharides and sepsis-related cytokines in vitro[J]..The Journal of Laboratory and Clinical Medicine,1999(1)
[3]Mortality is increased by procalcitonin and decreased by an antiserum reactive to procalcitonin in experimental sepsis[J].Eric S.Nylen;;Kevin T.Whang;;Richard H.Snider;;Paul M.Steinwald;;Jon C.White;;Kenneth L.Becker.Critical Care Medicine,1998(6)
[4]探讨PCT、CRP、WBC计数在抗生素合理应用中的监控作用[J].朱柏珍;陈海英;沈璐;雷艳英;詹铀超;骆春华.今日药学,2014(08)
[5]胡俊峰.PCT单克隆抗体的制备及其ELISA检测方法的初步建立[D].河南工业大学,2016.