背景[1-3]
小鼠心钠肽(ANP)Elisa试剂盒是一种专门用于检测小鼠血清、血浆、组织匀浆等样本中心钠肽（ANP）浓度的试剂盒。它基于酶联免疫吸附法（ELISA）的原理，通过特定的抗体与样本中的ANP结合，进而通过一系列反应产生可测量的信号，从而实现对ANP的定量检测。
该试剂盒的组成通常包括预包被酶标板、标准品、生物素化的抗小鼠ANP、辣根过氧化物酶标记的Streptavidin等试剂。在实验过程中，首先需要收集样本并进行适当的处理，然后将样本和标准品加入酶标板中，与预包被的抗体结合。接着，加入生物素化的抗小鼠ANP和辣根过氧化物酶标记的Streptavidin，形成免疫复合物。最后，加入底物工作液进行显色反应，通过测定吸光度（OD值）来计算样本中ANP的浓度。
使用小鼠心钠肽（ANP）ELISA试剂盒时，需要遵循一定的操作步骤和注意事项，以确保实验结果的准确性和可靠性。例如，在收集样本时需要注意避免污染和反复冻融，加样时需要保证每个孔中加入的样本量相同，并且在温育、洗涤、显色等步骤中需要控制时间和温度等条件。
小鼠心钠肽（ANP）ELISA试剂盒是一种方便、快捷、准确的检测工具，可以帮助研究人员和医生更好地了解小鼠体内ANP的表达水平和功能状态，为相关疾病的诊断和治疗提供有力的支持。
小鼠心钠肽(ANP)Elisa试剂盒
小鼠心钠肽(ANP)Elisa试剂盒操作步骤：
实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。
1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。
3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。
4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。
5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。
6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。
7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。
应用[4][5]
小鼠心钠肽(ANP)Elisa试剂盒可以用于IL-18及COX2介导ET-1调控缺氧心房ANP分泌的作用机制探究
分别在离体搏动大鼠心房,体外培养的HL-1心房肌细胞及大鼠在体心房建立缺氧模型,观察内源性ET-1对IL-18和COX2及L-PGDS表达的影响,探讨其对ANP表达和分泌的作用机制,为阐明缺氧时ANP分泌的机理和临床利用提供必要的理论和实验依据。
实验方法:1.缺氧模型的制备:(1)取SD大鼠的左心房挂置于离体搏动大鼠心房灌流装置,并采用N2替代O2的方法建立离体搏动大鼠心房缺氧模型;(2)使用三气细胞培养箱(1%O2,94%N2,5%CO2)构建HL-1心房肌细胞缺氧模型;(3)将SD大鼠置于常压缺氧舱,设置气体环境为10%O2,90%N2以制备在体大鼠缺氧模型。2.利用多道生理信号采集系统连接压力感受器观察并记录心房搏动压。3.利用实时定量PCR(quantitative real-time PCR,q-PCR)检测ANP、ET-1、IL-18、活化转录因子3(activating transcription factor 3,ATF3)、淋巴增强因子1(lymphoid enhancer factor,LEF1)和COX2的mRNA水平。4.采用小鼠心钠肽(ANP)Elisa试剂盒检测ANP和ET-1的含量。
参考文献
[1]IRF2 contributes to myocardial infarction via regulation of GSDMD induced pyroptosis.[J].Li Yongxing;Wang Yan;Guo Hua;Wu Qinghua;Hu Yamin.Molecular medicine reports,2022
[2]Antibodies against Angiotensin II Type 1 and Endothelin 1 Type A Receptors in Cardiovascular Pathologies[J].Civieri Giovanni;Iop Laura;Tona Francesco.International Journal of Molecular Sciences,2022
[3]Special Issue:Hypoxia-Inducible Factors:Regulation and Therapeutic Potential[J].Hirota Kiichi.Biomedicines,2021
[4]Targeting Endothelin in Alzheimer’s Disease:A Promising Therapeutic Approach[J].Sharma Shiwali;Behl Tapan;Kumar Anoop;Sehgal Aayush;Singh Sukhbir;Sharma Neelam;Bhatia Saurabh;Al Harrasi Ahmed;Bungau Simona.BioMed Research International,2021
[5]李想.IL-18及COX2介导ET-1调控缺氧心房ANP分泌的作用机制探究[D].延边大学,2023