背景[1-3]
ILP2抗体也称为抑制细胞凋亡样蛋白2抗体（Inhibitor of Apoptosis Protein 2 Antibody），是一种用于研究ILP2蛋白表达和功能的工具。ILP2蛋白是一种在细胞凋亡和细胞存活中起重要作用的蛋白质，属于IAP（Inhibitor of Apoptosis Proteins）家族。
ILP2抗体通常用于免疫组化（IHC）、蛋白质印迹（Western Blotting，WB）等实验技术中，以检测ILP2蛋白在细胞和组织中的表达水平。这些实验技术可以帮助研究人员了解ILP2在细胞凋亡、细胞存活、肿瘤发生和发展等生物学过程中的作用和机制。
ILP2抗体的制备和应用需要遵循严格的实验规程和质量控制标准。通常情况下，ILP2抗体是通过免疫动物（如兔或鼠）获得的，并经过纯化和验证以确保其特异性和灵敏度。
ILP2抗体
制备ILP2（Inhibitor of Apoptosis Protein 2）抗体通常涉及一系列复杂的步骤，这些步骤通常在生物技术和生物制药公司或高级研究实验室中进行。以下是制备ILP2抗体的基本步骤：
1.选择抗原：
首先，需要获得或合成纯化的ILP2蛋白或其特定的抗原片段。这个片段应该包含ILP2的免疫原性区域，以便能够引发免疫反应。
2.免疫动物：
将ILP2抗原注射到免疫原性动物（如兔子、小鼠或大鼠）中，以激发其免疫系统产生抗体。这通常通过多次注射（称为加强注射）来完成，以增强免疫反应。
3.收集血清：
在免疫接种后，收集动物的血液样本，并从中分离出血清。血清中含有对抗原（即ILP2）的特异性抗体。
4.纯化抗体：
使用各种色谱技术和亲和纯化方法（如蛋白质A/G亲和色谱、抗原亲和色谱等）从血清中分离和纯化ILP2抗体。
5.抗体鉴定和表征：
通过Western blot、ELISA、免疫沉淀等实验方法，对纯化的ILP2抗体进行鉴定和表征，确保其特异性和亲和力满足研究或应用需求。
6.单克隆抗体的制备（如果需要）：
如果需要高度特异性的单克隆抗体，可以从免疫动物的脾脏中提取B淋巴细胞，并通过杂交瘤技术将它们与骨髓瘤细胞融合。这些杂交细胞（杂交瘤）可以产生仅针对ILP2的单一类型的抗体（单克隆抗体）。
7.抗体的进一步处理：
根据实验或应用需求，对ILP2抗体进行进一步的处理，如偶联到荧光染料、酶或其他标记物上，以便进行更复杂的实验。
8.质量控制和保存：
对制备的ILP2抗体进行质量控制，确保其质量和稳定性满足标准。然后，将抗体保存在适当的条件下，以供后续实验使用。
应用[4][5]
ILP2抗体可以用于凋亡抑制蛋白样蛋白2对乳腺癌细胞生长的作用及机制
凋亡抑制蛋白样蛋白2(Inhibitor of apoptosis protein-like protein-2,ILP-2)属于凋亡抑制蛋白(Inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)家族成员,是定位于人19号染色体(q13.3-13.4)上高度保守的基因,其过表达会使细胞迁移、增殖及凋亡失衡,进而促进癌细胞生长。2012年XIANG等利用双向电泳分析乳腺癌患者血清和健康人血清时发现,ILP-2在乳腺癌患者血清中异常高表达。据此我们推测,ILP-2与乳腺癌的发生发展密切相关,进一步探究ILP-2对乳腺癌细胞生长的作用机制,为乳腺癌靶向治疗及研制相应抗癌药物提供理论依据。
本研究利用免疫组化检测乳腺癌组织及癌旁组织中ILP-2的表达,通过分析34例乳腺癌组织及24例癌旁组织,结果显示ILP-2在乳腺癌组织中高表达。采用ILP2抗体Western blot检测乳腺细胞(HCC-1937、MX-1、MCF-7)中ILP-2的表达,Western blot结果表明,与乳腺正常上皮细胞相比较,乳腺癌细胞中ILP-2有高表达,进一步表明ILP-2与乳腺癌MCF-7细胞生长关系密切。进一步采用干扰片段(siRNA-3、siRNA-5、siRNA-NC)敲低ILP-2的表达,应用MTT法、刻痕实验、AO-EB染色法分别检测3株乳腺癌细胞的生长活性、细胞的迁移及细胞的凋亡,分析ILP-2对MCF-7细胞生长的作用。
ILP2抗体结果显示在敲低ILP-2表达的乳腺癌细胞中,细胞存活率及细胞迁移率都低于对照组,而细胞的凋亡率增加。因此,说明ILP-2能够有效促进细胞生长活性,增加细胞的迁移并有效抑制细胞的凋亡。为寻找在乳腺癌MCF-7细胞中与ILP-2相互作用的蛋白质,采用免疫共沉淀(CO-IP)及质谱技术,探究与ILP-2相互作用的蛋白质。通过ILP2抗体特异性,寻找与IgG对比明显的差异条带,进一步质谱技术鉴定,ILP2抗体结果显示ILP-2与CHK2有相互作用,免疫共沉淀联合免疫印迹反向得以验证。本研究深入探讨ILP-2促进乳腺癌细胞生长的分子机制,免疫印迹实验结果显示敲低ILP-2表达的MCF-7细胞中,Csapase-3、CHK2、pCHK2表达升高,Cdc25C、pCdc25C表达降低。说明ILP-2对MCF-7细胞增殖、凋亡的影响与CHK2调控的CHK2/Cdc25C信号通路有关。
参考文献
[1]Fumonisin B 1 inhibits apoptosis in HepG2 cells by inducing Birc-8/ILP-2[J].Anil A.Chuturgoon;;Alisa Phulukdaree;;Devapregasan Moodley.Toxicology Letters,2015
[2]IAPs and cell migration[J].Laurence Dubrez;;Krishnaraj Rajalingam.Seminars in Cell and Developmental Biology,2015
[3]Knockdown of WWP1 inhibits growth and induces apoptosis in hepatoma carcinoma cells through the activation of caspase3 and p53[J].Qian Cheng;;Xiaoxiao Cao;;Fuwen Yuan;;Guodong Li;;Tanjun Tong.Biochemical and Biophysical Research Communications,2014(3)
[4]The inhibitors of apoptosis(IAPs)as cancer targets[J].Allison M.Hunter;Eric C.LaCasse;Robert G.Korneluk.Apoptosis,2007(9)
[5]朱林.凋亡抑制蛋白样蛋白2对乳腺癌细胞生长的作用及机制[D].吉首大学,2019.