吸附法 收尿、沉淀、酸化 用特制塑料桶收集男性尿,尿液要求电导相当于20~30m·Ω-1,Ph在6.5以下,细菌数在1000/ml以下,夏天加0.8%苯酚防腐。尿液须在8h内处理完毕。将新鲜处理后的尿液冷却到1010C以下,用氢氧化钠(3nol/L)调节Ph到8.5,静置1h,虹吸上清液,有盐酸(3nol/L)中和OH-1至Ph5~5.5。得酸化的尿液。 新鲜男性尿NaOH,Ph8 →沉淀 上清尿液HCl,Ph5 →酸化酸化尿液 吸附、洗脱 取酸化后的尿液,每升尿液中加硅藻土10g(1%),在低于50C下不断搅拌使之吸附1h。该吸附物用50左右冷水洗涤后,装柱(柱比1:1),用氨水(0.02%)洗涤到流出溶液变清,再用含有氯化钠(1mol/L)的氨水(0.02%)洗脱尿激酶,直到当洗脱液变混时开始收集,收集量约为每吨尿收集15L洗脱液(100U/ml,3000U/mg)。 酸化尿硅藻土→吸附吸附冷 水50^→洗涤硅藻土柱NH3^·H2O→洗涤洗脱液 去热原、色素 洗脱液用饱和磷酸二氢钠调节Ph8,用氯化钠调节电导相当于22mm·Ω-1,通过QAE-Sephadex 色谱柱(该柱预先用pH8r磷酸缓冲液平衡),收集流出液。色谱柱应用磷酸缓冲液(保留体积不少3倍的柱体积)不断洗涤,并与流出液合并。 洗脱液QAE-Sephadex柱→去热原、色素流出液 CMC浓缩 流出液用乙酸(1mol/L)调节Ph4.2,用蒸馏水调节电导相当于 16~17mΩ-1,通过CMC色谱柱(该柱预先用0.1mol/L,Ph4.2的乙酸缓将溶液,电导相当于17mΩ-1,平衡约12h)色谱柱继续用不小于10倍柱体积的Ph4.2的乙酸-乙酸钠缓冲溶液洗涤色谱柱,洗脱完毕后,再用加氯化钠(0.1mol/L)的氨水(0.1%),Ph11.5~11.8洗脱尿激酶,尿激酶洗脱液成丝状流出,部分收集洗脱液(3000~40000U/ml,15000~20000U/mg)。 流出液CMC柱→浓缩}CMC柱NH3·H2,Ph11.5→洗涤洗脱液 透析、冻干 将洗脱液于40对水透析除盐24h,换水3~4次,透析液离心去沉淀,冻干,即得尿激酶。 洗脱液水40;24h^→透析、冻干成品 除菌、分装 将得到尿激酶抽检合格后,稀释,除菌,加入赋形剂,分装,冻干,即得尿激酶制剂。 尿激酶赋形剂→除菌、冻干尿激酶制剂
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