AMV逆転写酵素 化学特性,用途語,生産方法
解説
逆転写酵素，RNAの遺伝子を鋳型に，その遺伝情報をDNAに写し替える反応（逆転写）を触媒する酵素。1970年，H.M.テミンらとD.ボルティモアが独立に発見。RNAを遺伝子にもつウイルスの一部（HIVのようなレトロウイルス）は，いったん遺伝情報をDNAに逆転写することが増殖に不可欠で，ウイルスがもつ逆転写酵素か宿主細胞の逆転写酵素を利用する。通常はDNAからRNAに転写される遺伝情報の流れを，ちょうど逆転させる酵素であり，メッセンジャーRNAから相補的なDNA（cDNA）を試験管内で合成させるのに使うことができ，遺伝子解析において重要。 1本鎖RNAを鋳型にDNAを合成する酵素．遺伝情報としてRNAをもつレトロウイルスが細胞に感染すると，みずからが有する逆転写酵素を使ってRNAをDNAに変換したのち，宿主細胞の転写および翻訳装置を利用して増殖する．このようなレトロウイルス由来の逆転写酵素は，遺伝子工学になくてはならないものとなっている．発見当初は，RNA依存DNA合成酵素といわれた．
用途
cDNAの合成。
特長
RNaseH活性を除去してある。
説明
Enzyme possessed by retroviruses that allows
transcription of DNA from an RNA template. Such an enzyme
has never been isolated from other sources, but speculation
about its possible occurrence continues. Such an enzyme is
widely used experimentally in genetic engineering to allow the
formation of complementary DNA (cDNA) from purified RNA. The discovery of this enzyme faulted the widely held
central dogma, which stated that the information flow in nature
was always from DNA to RNA.
使用
Synthesizes a complementary DNA strand using single-stranded RNA or DNA in the presence of a primer
一般的な説明
M-MLV (Moloney murine leukemia virus) reverse transcriptase enzyme is isolated from
E. coli expressing a portion of the pol gene of M-MLV on a plasmid. MoMLV RT is made up of 671 amino acid residues. It is a DNA polymerase that uses single-stranded RNA, DNA, or an RNA-DNA hybrid (using a primer) to synthesize a complementary DNA strand.
純化方法
This enzyme produces the complementary DNA from the RNA (as template). These are purified by solubilising the virus with non-ionic detergents. Lysed virions are adsorbed on DEAE-cellulose or DEAE-Sephadex columns, and the enzymes are eluted with a salt gradient, then chromatographed on a phosphocellulose column and fractions with enzyme activity are eluted in a salt gradient. They are also purified from other viral proteins by affinity chromatography on a pyran-Sepharose column. [Verna Biochim Biophys Acta 473 1 1977, Smith Methods Enzymol 65 560 1980; see commercial catalogues for other transcriptases.]
AMV逆転写酵素 上流と下流の製品情報
原材料
準備製品