背景[1-6]
小鼠肾上皮细胞试剂盒适用于分离培养小鼠肾上皮细胞。本体系提供了小鼠肾上皮组织分离条件，分离单个细胞的效率较高。此外，小鼠肾上皮细胞试剂盒
还能保证所分离的细胞在培养基中具有很高的活性。利用的成纤维抑制体系，可以程度地降低所培养的肾上皮原代细胞中成纤维细胞的含量。小鼠肾上皮细胞培养试剂盒适合于培养小鼠的肾上皮细胞。
小鼠肾上皮细胞试剂盒
试剂盒包含：（1）OptiTDSTM小鼠肾上皮细胞组织解离液（2）小鼠肾上皮细胞组织处理缓冲液（3）FibrOutTM小鼠肾上皮细胞成纤维抑制剂。肾是脊椎动物的一种器官，属于泌尿系统的一部分，负责过滤血液中的杂质、维持体液和电解质的平衡，产生尿液经由后续管道排出体外；同时也具备内分泌的功能以调节血压。在人体中，正常成人具备两枚肾脏，位于腰部两侧后方。 其中，小鼠肾上皮细胞分离自正常小鼠肾组织，肾上皮细胞主要功能：（1）肾小管上皮细胞重吸收原尿中几乎全部的葡萄糖和氨基酸，并排泌非营养物质进入终尿。（2）细胞能分泌炎症介质如细胞因子和趋化因子，通过产生IL-8或直接趋化白细胞参与急性炎症反应。（3）是许多先天性疾病、代谢性疾病和炎症的主要损伤部位。（4）在移植肾炎症和新月体肾炎中上皮细胞表达IL-2R alpha和MHC-Ⅱ类抗原，参与肾免疫损伤的发生。小鼠肾上皮细胞传5代以上仍可以保持原代细胞的分化状态，进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。
应用[7][8]
小鼠肾上皮细胞试剂盒可用于Fractalkine通过Wnt/β-catenin信号通路参与HK2细胞和狼疮小鼠肾上皮-间质转分化的作用研究
利用慢病毒载体建立Fractalkine基因敲低的HK2稳定细胞株实验研究目的:利用慢病毒载体建立fractalkine(FKN)基因敲低的HK2稳定细胞株,为探讨FKN基因在肾脏组织肾小管上皮细胞(human renal proximal tubular cell,HK2)转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)重构中的作用奠定实验基础。方法:通过双酶切将FKN目的基因连接到GV248载体(hU6-MCS-Ubiquitin-EGFP-IRES-puromycin),经扩增、转化、验证、测序、质粒抽提,将携带目的基因的工具GV248载体质粒及病毒包装辅助质粒Helper1.0、Helper2.0转染293T细胞,完成慢病毒包装及质量检测后获取慢病毒工具载体LV-FKN-RNAi,病毒感染HK2细胞72小时后筛选稳定表达的细胞株HK2/LV-FKN-RNAi,采用western blotting测定FKN的表达水平。CCK-8检测细胞活力。流式细胞术检测细胞凋亡率。
结果:经对比,构建LV-FKN-RNAi阳性克隆序列与目的基因FKN相符;HK2细胞达到80%感染效率的感染条件为:在enhanced infection solution(ENi.S)培养基中进行感染,设定感染复数(multiplicity of infection,MOI)为10,感染时间为72小时。Western blotting结果显示,经筛选的HK2/LV-FKN-RNAi细胞中FKN基因表达水平降低(P<0.01)。细胞形态成梭形,多有伪足出现。CCK-8结果显示,与空白对照组相比,FKN基因敲低组细胞活力降低(P<0.01)。流式细胞术检测结果显示,与空白对照组相比,FKN基因敲低组细胞凋亡率增加(P<0.01)。
结论:本研究成功构建一种低表达FKN基因的慢病毒载体;LV-FKN-RNAi感染HK2细胞后可实现目的基因的低表达,并且FKN基因敲低后HK2细胞活力下降,凋亡率增加。经筛选的HK2/LV-FKN-RNAi细胞株可用于后续实验研究。第二部分Fractalkine通过Wnt/β-catenin信号通路参与血管紧张素Ⅱ诱导的HK2细胞上皮-间质转分化的作用研究目的:本课题以Fractalkine(FKN)为研究的关键点,从体外细胞层面着手,深入探讨FKN在HK2细胞中的作用机制。通过体外细胞实验观察HK2细胞过表达FKN基因和低表达FKN基因后细胞中FKN、波形蛋白(Vimentin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙粘蛋白(E-cadherin)表达水平变化,及血管紧张素(Ang)Ⅱ、XAV939对HK2细胞的具体作用机制,探讨Wnt/β-cadherin信号通路在细胞上皮间质转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程中的作用以及FKN对该信号通路的具体影响,深入了解FKN在HK2细胞中的作用机制,为防治狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)提供科学的理论依据。
参考文献
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[8]付冬冬.Fractalkine通过Wnt/β-catenin信号通路参与HK2细胞和狼疮小鼠肾上皮-间质转分化的作用研究[D].右江民族医学院,2019.