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伊红Y(水溶)的配制法

发布日期:2020/4/24 10:37:20

背景及概述[1]

伊红是由醌式苯环结构的发色基团和卤素原子溴及钠盐的助色基团所组成的酸性染料。伊红是人工合成的化学试剂,外观呈砖红色或酱红色结晶体。属荧光酚酞衍生物类,具有绿黄色荧光。其共有4种类型,即伊红Y、伊红B、甲基伊红及乙基伊红。虽然4种类型伊红化学作用有相似之处,但伊红Y是与苏木精配对最理想的对比染料。其在水中离解成带负电荷的阴离子,与蛋白质的氨基正电荷(阳离子)结合而使细胞质染色,细胞质、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色,与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。因此伊红是最常用的胞质染料之一。

HE染色效果除与组织是否新鲜、固定是否及时以及脱水包埋过程是否恰当有关外,染色液的配置和使用也是重要的环节之一,染色液的质量最终决定染色的效果。有实验使用伊红染色剂均是伊红Y(水溶),在长期的工作实践中发现,采用不同的伊红配置法所得的染液,HE染色效果差异明显。

配制法[1]

伊红Y(水溶)的配制主要有两种:

1)传统法:取伊红1g,加双蒸水100ml,用玻璃棒充分搅拌溶解后,静置过夜,过滤后待用,在使用前加入冰醋酸0.1ml。

2)改良法:取伊红1g,加入双蒸水100ml,用玻璃棒充分搅拌溶解后,加入浓盐酸2ml,充分搅拌,静置过夜,过滤,沉淀物用双蒸水冲洗2次,然后将沉淀物连同滤纸放入恒温干燥箱内充分干燥,滤液弃之不用。将已干燥的沉淀物置于烧杯中,加入95%乙200ml,搅拌溶解后待用,使用前用95%乙醇稀释1倍,即再加入95%乙醇200ml。

主要参考资料

[1] 水溶性伊红Y不同配置法对HE染色效果的影响

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