磷脂铁苏木素(FEH)的操作方法

2020/4/29 14:47:54

背景及概述[1]

磷脂铁苏木素(FEH)染色液用于磷脂染色。磷脂(Phospholipid)是指含有磷酸的脂类,属于复合脂。磷脂是生物膜的成分,分为甘油磷脂和鞘磷脂两类。磷脂为两性分子,一端为亲水的含氮或磷的头,另一端为疏水(亲油)的长烃基链。Elleder发现磷脂可通过三价铁苏木素显示出来,该法比DAH更简便、快速、敏感。其缺点是只有组织用丙酮脱脂后染色效果才好,而且有时细胞核和脂质会被同时染色呈黑蓝色。

组成[1]

操作步骤(仅供参考) [1]

1、室温下用氯仿:甲醇溶液(1:1)浸泡1张切片1h作为对照,4℃条件下用无水丙酮浸泡另外1张切片15min。

2、入FeH固定液固定30min。

3、蒸馏水冲洗。

4、提前配制FeHstain:每取5ml苏木素溶剂,加入一支FeH苏木素0.1g。充分溶解后,加入25mlFeHbuffer,即为FeHstain。

5、入FeHstain染色7~10min。

6、蒸馏水冲洗。

7、用蒸馏水等量稀释FeH分化液后,切片入稀释后的FeH分化液浸泡数次。

8、自来水冲洗。

9、丙酮脱水,二甲苯透明,DPX封片剂封固。

注意事项[1]

1、磷脂容易溶解,所以组织取出后应立即固定,否则难以着色。

2、本染色液对冰冻切片的染色效果较好。

3、染色后的标本务必避光保存,否则容易褪色。

4、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

参考资料

[1]磷脂铁苏木素(FEH)染色液说明书

 

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