背景[1-3]
人抗丁型肝炎病毒抗体(ANTI-HDV)ELISA KIT用于固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）。已知anti-HDV浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将anti-HDV和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中anti-HDV的活性浓度呈比例关系。
丁型肝炎病毒体形细小，直径35～37nm，核心含单股负链共价闭合的环状RNA和HDV抗原（HDAg），其外包以HBV的HBsAg。经核酸分子杂交技术证明，HDV RNA与HBV DNA无同源性，也不是宿主细胞的RNA。HDV的致病机理与免疫性还不清楚。一般认为HDV对肝细胞有直接的致细胞病变作用。在HDV感染黑猩猩的动物实验中，HDV—RNA的消长与肝脏损害的程度相关。丁型肝炎的收藏，HDAg主要存在于肝细胞核内，随后出现HDAg血症，可用免疫荧光、放射免疫或酶联免疫吸附试验以及核酸杂交技术进行检测。但患者标本应先经去垢剂处理，除去表面的HBsAg以暴露出HDAg，才能检测到。HDAg可刺激机体产生特异的抗—HDV，先是lgM型，随后是lgG型抗体的出现。在慢性感染过程中所检出的抗体常以lgG为主。血清中抗HDV测定有助于HDV感染的诊断，尤其高滴度可确诊为慢性HDV感染。抗HDV-IgG阳性见于HBsAg阳性者，是诊断丁型肝炎的可靠指标，即使HDV感染终止后仍可持续多年。抗HDV-IgM阳性表示急性或近期HDV感染，有助于本病的早期诊断，并能区别HBV和HDV同时感染还是重叠感染。同时感染常出现一过性抗HDV-IgM，然后出现或不出现抗HDV-IgG;重叠感染时抗HDV-IgM持续升高，并伴有抗HBV-IgG阳性，症状加重，预后不良。
应用[4][5]
人抗丁型肝炎病毒抗体(ANTI-HDV)ELISA KIT用于丁型肝炎病毒稳定转染肝癌细胞系的建立。
丁型肝炎病毒(hepatitis D virus,HDV)是一种类病毒样核糖核酸(ribonucleic acid,RNA)病毒,这种缺陷型病毒需要乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)提供乙型肝炎病毒表面抗原(Hepatitis B virus surface antigen,HBsAg)用于病毒的组装、释放和感染。与单独的HBV感染相比,合并HDV感染后会加速肝硬化的程度,会增加暴发性肝炎和肝细胞癌的发生率。目前丁型肝炎病毒的获取方式有两种:一种是从丁型肝炎患者的血清中直接提取HDV,但我国丁型肝炎的患者比较少见,若想依赖从血清中直接提取HDV的这种途径不现实;另外一种是基于质粒瞬时转染HuH-7等细胞系的HDV包装方法,但是当研究需要大量病毒时工作量会明显增大,而且实验批次之间的可重复性也较差。
采用分子克隆方法构建出含HDV复制子和HBsAg表达框的piggyBac(PB)转座子载体并进行了功能评价。将构建好的载体瞬时转染Hu H-7细胞,通过检测细胞上清HDV RNA和HBsAg的含量初步确定载体的功能完好,相关功能基因得到有效表达,并通过浓缩细胞上清病毒后感染HBV受体钠离子/牛磺胆酸共转运蛋白(Na+/taurocholate Cotransporting Polypeptide,NTCP)的稳定转染细胞系HepG2.N9确定了细胞上清含有感染性HDV颗粒。进一步通过化学发光法检测细胞上清HBV表面抗原的含量,ELISA检测细胞上清HBV preS1的水平,以及定量PCR检测细胞上清HDV病毒滴度,利用HBV受体NTCP稳定转染细胞系HepG2.N9评价了细胞上清HDV病毒体外感染性,结果表明本研究成功建立了支持HDV复制、包装、分泌的人源肝癌细胞系K7,其细胞上清可检测到大量的HBsAg并可检测到HBV preS1的存在,细胞上清HDV滴度达到1E+08GE/ml(GE,genome equivalents)以上,并且证明本细胞所分泌的HDV病毒体外具有较好的感染性。
参考文献
1.Celso Cunha;Jo?o Paulo Tavanez;Severin Gudima;;Hepatitis delta virus:A fascinating and neglected pathogen[J];World Journal of Virology;
2.John M Taylor;;Host RNA circles and the origin of hepatitis delta virus[J];World Journal of Gastroenterology;
3.杨松;邢卉春;成军;;慢性丁型肝炎抗病毒治疗进展[J];中华实验和临床感染病杂志;
4.卢学新;伊瑶;毕胜利;;丁型肝炎的分子生物学特征及研究进展[J];中华实验和临床病毒学杂志;
5.李颖.丁型肝炎病毒稳定转染肝癌细胞系的建立[D].河北北方学院,2017.