背景[1-3]
Anti-ACTA2 Rabbit Monoclonal Antibody是一类可以特异性结合Anti-ACTA2的单克隆抗体，主要用于检测Anti-ACTA2的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。
检测原理：双抗体夹心法测定标本中Anti-ACTA2水平。用纯化的Anti-ACTA2抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入Anti-ACTA2，再与HRP标记的Anti-ACTA2抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的Anti-ACTA2呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中Anti-ACTA2浓度。
ACTA2（actin alpha 2）是一种肌动蛋白，有多个别名，包括α-肌动蛋白、α-肌动蛋白-2、主动脉平滑肌或α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)。Actins是球状多功能蛋白质的一个家族，形成微丝。ACTA2是6种不同肌动蛋白亚型之一，参与平滑肌的收缩。ACTA2（和所有actins一样）极其保守，几乎在所有哺乳动物中都有发现。在人类中，ACTA2由位于10q22-q24的ACTA2基因编码。该基因突变导致多种血管疾病，如胸主动脉疾病、冠状动脉疾病、中风、烟雾病和多系统平滑肌功能障碍综合征。ACTA2（α-SMA）目前被认为是肌成纤维细胞的标志。
应用[4][5]
用于MMP1通路轴对乳腺癌转移的研究
调控MMP1分泌的相关分子以及调控方式,为乳腺癌肺转移的基础和实验研究提供靶点。
方法：(1)人乳腺癌细胞株MDA-MB-231与V2M4细胞总蛋白与MMP1特异性抗体做免疫共沉淀,寻找与MMP1直接作用的蛋白；质谱分析所有免疫共沉淀蛋白并行western验证发现其中高低转移株的差异蛋白(ACTA2);
(2)以实时定量PCR检测相关蛋白mRNA水平变化；
(3) 以激光共聚焦证明细胞内MMP1与ACTA2蛋白确实存在结合；
(4) 以蛋白表达证明及Pull down实验表明蛋白相互作用的直接性；
(5) 构建ACTA2基因沉默质粒并稳定转染V2M4,进一步做western及实时定量PCR检测MMP1的表达；进行细胞侵袭实验及增殖实验,三维凝胶实验；免疫缺陷鼠乳房垫注射后观察体内成瘤及肿瘤肺转移情况；
(6) ACTA2病毒过表达载体构建,MDA-MB-435及MDA-MB-231转染,流式细胞仪筛选稳定转染细胞,并行ACTA2基因沉默质粒构建并稳定转染V2M4进一步做western及实时PCR检测MMP1表达情况,行细胞侵袭实验及增殖实验,三维凝胶实验；
(7) 利用含钙及无钙DMEM培养基检测钙对MMP1分泌的影响；
(8) 构建肌动蛋白特异性载体(pro-50)检测ACTA2聚合与解聚对MMP1分泌的影响；筛选钙特异性配体门控通道,得到TRPV6表达差异；
(9)构建TRPV6基因沉默载体并稳定转染Vb行体内体外实验证明钙通道对MMP1分泌的影响；以TRPV6的兴奋剂与抑制剂进一步验证实验结果。
参考文献
[1]Difference gel electrophoresis[J].Jonathan S.Minden,Susan R.Dowd,Helmut E.Meyer,KaiStühler.ELECTROPHORESIS.2009(S1)
[2]G-Protein–Coupled Receptors as Signaling Targets for Antiplatelet Therapy[J].Susan S.Smyth,Donna S.Woulfe,Jeffrey I.Weitz,Christian Gachet,Pamela B.Conley,Shaun G.Goodman,Matthew T.Roe,Athan Kuliopulos,David J.Moliterno,Patricia A.French,Steven R.Steinhubl,Richard C.Becker.Arteriosclerosis,Thrombosis,and Vascular Biology.2009(4)
[3]Increased expressions of cannabinoid receptor-1 and transient receptor potential vanilloid-1 in human prostate carcinoma[J].Gabriella Czifra,Attila Varga,Katalin Nyeste,Rita Marincsák,Balázs I.Tóth,Ilona Kovács,LászlóKovács,Tamás Bíró.Journal of Cancer Research and Clinical Oncology.2009(4)
[4]Functional genomics of cancer[J].Edison T Liu.Current Opinion in Genetics&Development.2008(3)
[5]石鹏程.MMP1通路轴对乳腺癌转移的研究[D].复旦大学,2010.