背景及概述[1]
三(2-羧基乙基)膦盐酸盐(TCEP盐酸盐)是一种新型的巯基化DNA的还原剂和去保 护剂。巯基化DNA末端硫原子在溶液中趋向于形成二聚体，特别是在存在氧气的情况下。这 种二聚化大大降低了一些偶联反应实验(如DNA在生物感应器中的固定)的效率；而在DNA溶 液中加入三(2-羧基乙基)膦盐酸盐(TCEP盐酸盐)，反应一段时间后除去，就可以降低DNA的 二聚化。三(2-羧基乙基)膦盐酸盐(TCEP盐酸盐)也常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可 用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。与巯基化DNA 的传统还原剂和去保护剂巯基乙醇或二硫苏糖醇(DTT)相比，三(2-羧基乙基)膦盐酸盐 (TCEP盐酸盐)的稳定性更高，不易被空气氧化，没有任何刺激性气味。
制备[1]
1.化合物三甲基3,3',3”-膦三基三丙酸酯的制备
在机械搅拌条件下，向250ml的反应瓶中加入质量分数为80％的四羟甲基氯化磷水溶液(71.2g，0.30mol)以及乙醇(75ml)，冰水冷却并用氮气保护，加入氢氧化钾(16.8g， 0.30mol)溶于23ml冰水的溶液，温度略有上升；然后滴加丙烯酸乙酯(90g，0.9mol)，控制温 度35-40℃，有大量固体生成，滴完保温搅拌4小时。向反应液中倒入300ml冰水，搅拌后抽 滤，用冰水洗涤滤饼，抽滤晾干得白色固体88g(即，化合物三甲基3,3',3”-膦三基三丙酸 酯)，收率86.6％，以供下一步反应使用。所得产物的核磁数据如下：1HNMR(CDCl3,400MHz):δ＝1.27(t,9H),1.75(t,6H),2.45(dt,6H),4.15(q,6H)。
2.化合物三(2-羧基乙基)膦盐酸盐(TCEP盐酸盐)的制备
在机械搅拌条件下，向250ml反应瓶中加入上述反应所制备的三甲基3,3',3”-膦 三基三丙酸酯(88g，0.26mol)以及摩尔浓度为12mol/L的浓盐酸(120ml，1.44mol)，搅拌升温至80℃，固体逐渐溶解，继续保温反应3小时，搅拌并用冰水冷却，析出白色固体，抽滤，滤饼用蒸馏水重结晶，得白色晶体，即三(2-羧基乙基)膦盐酸盐，烘干，称重57.2g，收率 76.9％。mp174-176℃。核磁数据如下：1HNMR(D2O,400MHz):δ＝2.57(dt,6H),2.88(dt,6H)。
应用[2-3]
应用一、
CN201910350963.7公开了一种蛋白质组样本处理试剂盒、处理方法及应用。该试剂盒包括：三(2-羰基乙基)磷盐酸盐、2,2-二氯乙酰胺、脱氧胆酸钠以及缓冲液。应用本发明的技术方案，蛋白质组样本处理前，将本发明试剂盒中的三(2-羰基乙基)磷盐酸盐、2,2-二氯乙酰胺、脱氧胆酸钠以及缓冲液配成处理液，其中，通过脱氧胆酸钠来对细胞/组织样本进行裂解和细胞内全蛋白变性，三(2-羰基乙基)磷盐酸盐作为还原剂，2,2-二氯乙酰胺作为烷基化试剂，蛋白质组样本在处理液中数分钟即可完成裂解与还原烷基化。也就是说，在本发明中裂解与还原、烷基化一步完成，这样使得蛋白质组样本处理流程简单，而且节约了时间。
应用二、
CN201811195644.5报道了一种低共熔溶剂整体柱酶反应器及其制备方法。制备步骤：将自由基引发剂偶氮二异丁腈加入低共熔溶剂/离子液体中，超声分散后，加入功能单体甲基丙烯酸、共聚单体甲基丙烯酸丁酯、交联剂二甲基丙烯酸乙二醇酯，超声溶解后注入毛细管中，热引发合成整体柱，用三(2-羰基乙基)磷盐酸盐（TCEP-HCl）试剂使胰蛋白酶中的双硫键还原为巯基，加入过硫酸铵和N,N’-亚甲基双丙烯酰胺制备酶衍生液，在室温下与整体柱反应固定到整体柱表面，进行酶解蛋白。整体柱结构稳定，对酶活性影响较低，可作为重复利用的新型酶反应器酶解蛋白溶液。本发明采用原位聚合法在毛细管内直接聚合，合成方法简便易行，操作简单，聚合时间较短，成本低廉，具有广泛的应用前景。
参考文献
[1] [中国发明,中国发明授权] CN201310173962.2 三(2-羰基乙基)磷盐酸盐的制备方法【公开】/三(2-羧基乙基)膦盐酸盐的制备方法【授权】
[2] CN201910350963.7蛋白质组样本处理试剂盒、处理方法及应用
[3] CN201811195644.5低共熔溶剂整体柱酶反应器及其制备方法