水解酶结构域蛋白14B抗体的应用

2021/2/18 10:12:13

背景[1-3]

水解酶结构域蛋白14B抗体是一类可以特异性结合水解酶结构域蛋白14B的多克隆抗体,主要用于体外检测水解酶结构域蛋白14B的免疫学实验。

水解酶是催化水解反应的一类酶的总称(如胰蛋白酶就是水解多肽链的一种水解酶),也可以说它们是一类特殊的转移酶,用水作为被转移基团的受体。

蛋白水解酶(protease,proteinase)催化多肽或蛋白质水解的酶的统称,简称蛋白酶。广泛分部于动物、植物以及细菌当中,种类繁多,在动物的消化道以及体内各种细胞的溶酶体内含量尤为丰富。蛋白酶对机体的新陈代谢以及生物调控起重要作用。分子量一般在2--3万左右。蛋白酶按水解底物的部位可分为内肽酶以及外肽酶,前者水解蛋白质中间部分的肽键,后者则自蛋白质的氨基或羧基末端逐步降解氨基酸残基。

水解酶结构域蛋白14B机构图

水解酶结构域蛋白14B抗体优点:

①耐热、耐酸、耐碱、抗有机溶剂以及金属离子,稳定性好,室温下可以长期保存;

②制备简单,操作方便,可以进行批量生产;

③不必免疫动物,且可获得免疫动物所不能得到的“抗体”;

④可以反复使用;

⑤价格低廉。因此,设计、合成既具有类似生物抗体的高亲合性和高专一性,又具有耐热、耐酸、耐碱且又可以长期稳定的人工抗体,在部分领域替代生物抗体以进行仿生分子识别,或者完成一些生物抗体所不能完成的工作,具有重要的科学意义,在化学、生命科学和环境科学等方面具有广阔的应用前景

应用[4][5]

用于肾癌及癌旁正常肾组织定量比较蛋白质组学研究

研究应用2D-DIGE蛋白质组学技术平台,首次成功制备了荧光素标记的肾癌组织与癌旁正常肾组织差异显示双向凝胶图谱;建立了定量比较蛋白质组学技术路线,并掌握了蛋白质组学研究的基本方法。为揭示肾癌发病机制、探索肾癌肿瘤标记物提供新的研究思路。

肾癌组织差异表达蛋白点质谱鉴定1.目的对2D-DIGE筛选的差异表达蛋白质点进行质谱鉴定,明确差异表达蛋白质的名称并文献检索差异蛋白质的功能。

2. 材料和方法在考染制备胶上找到前述27个相应的差异表达蛋白质点,沿染色边缘切下选定的蛋白点。经脱色及胶内胰蛋白酶消化,提取肽混合物。采用MALDI-TOF MS或串联质谱技术对差异蛋白点进行分析,得到肽质量指纹图谱(peptide mass fingerprinting, PMF),使用Masort检索程序进行检索,数据库选择Swiss-Prot, Mascort软件给出蛋白质得分确认质谱鉴定结果。

结果27个差异蛋白点共成功鉴定出26种蛋白质。其中11个蛋白质在肾癌组织中表达上调,分别为:加帽蛋白G (CAPG)、纤维蛋白原-β(FIBB)、核苷二磷酸激酶A (NDPK-A)、β-防御素107(D107A)、尼克酰胺-N-甲基转移酶(NNMT)、膜联蛋白A4(ANXA4)、磷酸甘油酸激酶1(PGK1)、α-烯醇化酶(ENOA)、血清白蛋白(ALBU)、微纤维相关糖蛋白4(MFAP4)、磷酸甘油酸变位酶1(PGAM1)。

15个蛋白质在肾癌组织中表达下调,分别为:线粒体琥珀酰辅酶A连接酶-β(SUCB1)、甜菜碱-高半胱氨酸S-甲基转移酶2(BHMT2)、甘油-3-磷酸脱氢酶辅酶Ⅰ(GPDA)、酮己糖激酶(KHK)、过氧化物酶-4(PRDX4)、含自水解酶结构域蛋白14B (ABHEB)、钙结合蛋白(CALB1)、线粒体短/支链特异性酰基辅酶A脱氢酶(ACDSB),细胞色素b-cl复合亚基Rieske样蛋白1(UCRIL)、线粒体烯酰辅酶A水合酶(ECHM).谷胱甘肽S-转移酶P(GSTP1)、醛糖1-表异构酶(GALM)、线粒体NADH脱氢酶黄素蛋白2(NDUV2)、Ribosyldihydronicotinami脱氢酶(NQ02)、谷胱甘肽过氧化物酶3(GPX3)。

参考文献

[1]Immunohistochemical evidence for the over-expression of Glutathione peroxidase 3 in clear cell type ovarian adenocarcinoma[J] . Hee Joong Lee,Jin Hwan Do,Sumi Bae,Sanghwa Yang,Xianglon Zhang,Ahwon Lee,Young Jin Choi,Dong Choon Park,Woong Shick Ahn.  Medical Oncology . 2011 (1)

[2]An 8-gene signature, including methylated and down-regulated glutathioneperoxidase 3, of gastric cancer[J] . Xianglan Zhang,Jung-Jin Yang,Yoon Kim,Ki-Yeol Kim,Woong Ahn,Sanghwa Yang.  International Journal of Oncology . 2010 (2)

[3]Actin complexes in the cell nucleus: new stones in an old field[J] . E. Castano,V. V. Philimonenko,M. Kahle,J. Fukalová,A. Kalendová,S. Yildirim,R. Dzijak,H. Dingová-Krásna,P. Hozák.  Histochemistry and Cell Biology . 2010 (6)

[4]Detection of novel biomarkers of liver cirrhosis by proteomic analysis[J] . Christian M?lleken,Barbara Sitek,Corinna Henkel,Gereon Poschmann,Bence Sipos,Sebastian Wiese,Bettina Warscheid,Christoph Broelsch,Markus Reiser,Scott L. Friedman,Ida Torn?e,Anders Schlosser,Günter Kl?ppel,Wolff Schmiegel,Helmut E. Meyer,Uffe Holmskov,Kai Stühler.  Hepatology . 2009 (4)

[5]陈壮飞. 肾癌及癌旁正常肾组织定量比较蛋白质组学研究[D].南方医科大学,2011.

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