Β淀粉样前体蛋白裂解酶2抗体的应用

2021/2/24 9:59:53

背景[1-3]

Β淀粉样前体蛋白裂解酶2抗体是可以特异性结合Β淀粉样前体蛋白裂解酶2的一类多克隆抗体,主要用于Β淀粉样前体蛋白裂解酶2的体外检测实验。

淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)是一种广泛存在于全身组织细胞上的单次跨膜蛋白,其经蛋白酶裂解后会产生具有毒性作用的β-淀粉样蛋白,迄今为止人们对APP真正的生理功能仍知之甚少。

Β淀粉样前体蛋白裂解酶2免疫组化图

淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)是一种广泛存在于全身组织细胞上的单次跨膜蛋白,因其经蛋白酶裂解后产生具有毒性作用的β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)而广受关注,但迄今为止人们对APP真正的生理功能仍知之甚少,许多学者认为APP裂解后形成的Aβ沉积所形成的老年斑是AD发病的重要原因。

老年斑的主要成分是39-43氨基酸长的β淀粉样肽(β-amyloid peptide,Aβ),Aβ由β淀粉样前体蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)水解而来,APP可以被三种水解酶裂解:α-secretase、β-secretase、γ-secretase。α-secretase的水解位点在APP跨膜区的Aβ区内,产生一长的可溶性的胞外结构α-APPs和一83碱基的C末端(COOH-terminal fragment,CTF)——C83,不产生Aβ。

而淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)经β淀粉样前体蛋白裂解酶(β-siteAPP cleaving enzyme,BACE1)和γ-分泌酶裂解产生Aβ。淀粉级联学说认为老年斑的核心成分β-淀粉样肽(β-amyloid peptide,Aβ)是AD发生的主要原因。BACE1(β-secretase)酶是Aβ形成的关键酶。老年斑或Aβ可以促进AD的疾病进展,而且是AD临床表现的关键性因素。

应用[4][5]

用于干预β-淀粉样前体蛋白裂解酶基因减少神经细胞β淀粉样蛋白的产生研究

利用干扰技术应用siRNA对BACE1基因进行干扰抑制,观察BACEl基因在SK-N-SH细胞株中的表达的改变,以及Aβ产生的改变情况。

1、利用siRNA干扰技术,采用化学合成的siRNA干扰或封闭BACE1基因,观察BACE1的表达改变。2、进一步观察BACE1基因的表达下降后,对体外培养的神经细胞Aβ产生的影响。

实验方法1、人类的神经母细胞瘤细胞SK-N-SH细胞正常情况下,表达APP和BACE1,利用SK-N-SH细胞作为体外研究的细胞系。

2、利用Ambion公司的Silencer?pre-designed siRAN Specificationsystem设计合成了3对BACEl基因双链siRNA。3对siRNAs特异性的针对BACE1基因。

3、利用Ambion公司的siPORT NeoFX转染试剂转染siRNA入SK-N-SH细胞。为比较、观察siRNA对BACE1基因的干扰作用,分别使用了10μM-50uM浓度不等的siRNA转染SK-N-SH细胞,并且分别从12-48小时搜集细胞,进行检测。

4、应用RT-PCR在的mRNA水平上检测BACE1基因的表达。

5、应用Western blot方法,检测转染48小时后的神经细胞的BACE1蛋白表达。

6、应用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测分泌到细胞外的Aβ42的量。转染后6小时将siPORT NeoFX转染试剂换成MEM细胞培养液继续培养SK-N-SH细胞,并且每6-12小时收集培养液上清用于检测Aβ42。

参考文献

[1]P2-052[J].Juan Manuel Maler,Hans W.Klafki,Hermann Esselmann,Nikolaus Kunz,Sabine Paul,Johannes Kornhuber,Jens Wiltfang.Alzheimer’s&Dementia:The Journal of the Alzheimer’s Association.2006(3)

[2]Twenty Years of the Alzheimer’s Disease Amyloid Hypothesis:A Genetic Perspective[J].Rudolph E.Tanzi,Lars Bertram.Cell.2005(4)

[3]Are mitochondria critical in the pathogenesis of Alzheimer’s disease?[J].P.Hemachandra Reddy,M.Flint Beal.Brain Research Reviews.2005(3)

[4]Role of protein aggregation in mitochondrial dysfunction and neurodegeneration in Alzheimer’s and Parkinson’s diseases[J].Makoto Hashimoto,Edward Rockenstein,Leslie Crews,Eliezer Masliah.NeuroMolecular Medicine.2003(1)

[5]高素琴.干预β-淀粉样前体蛋白裂解酶基因减少神经细胞β淀粉样蛋白的产生[D].山东大学,2009.

免责申明 ChemicalBook平台所发布的新闻资讯只作为知识提供,仅供各位业内人士参考和交流,不对其精确性及完整性做出保证。您不应 以此取代自己的独立判断,因此任何信息所生之风险应自行承担,与ChemicalBook无关。如有侵权,请联系我们删除!
阅读量:132 0

欢迎您浏览更多关于Anti-BACE2的相关新闻资讯信息